Рко расшифровка аббревиатуры: Что такое расчетно-кассовое обслуживание в банке (РКО)

Содержание

Что означает RKO? -определения RKO

Вы ищете значения RKO? На следующем изображении вы можете увидеть основные определения RKO. При желании вы также можете загрузить файл изображения для печати или поделиться им со своим другом через Facebook, Twitter, Pinterest, Google и т. Д. Чтобы увидеть все значения RKO, пожалуйста, прокрутите вниз. Полный список определений приведен в таблице ниже в алфавитном порядке.

Основные значения RKO

На следующем изображении представлены наиболее часто используемые значения RKO. Вы можете записать файл изображения в формате PNG для автономного использования или отправить его своим друзьям по электронной почте.Если вы являетесь веб-мастером некоммерческого веб-сайта, пожалуйста, не стесняйтесь публиковать изображение определений RKO на вашем веб-сайте.

Все определения RKO

Как упомянуто выше, вы увидите все значения RKO в следующей таблице. Пожалуйста, знайте, что все определения перечислены в алфавитном порядке. Вы можете щелкнуть ссылки справа, чтобы увидеть подробную информацию о каждом определении, включая определения на английском и вашем местном языке.

Что означает RKO в тексте

В общем, RKO является аббревиатурой или аббревиатурой, которая определяется простым языком. Эта страница иллюстрирует, как RKO используется в обмена сообщениями и чат-форумах, в дополнение к социальным сетям, таким как VK, Instagram, Whatsapp и Snapchat. Из приведенной выше таблицы, вы можете просмотреть все значения RKO: некоторые из них образовательные термины, другие медицинские термины, и даже компьютерные термины. Если вы знаете другое определение RKO, пожалуйста, свяжитесь с нами. Мы включим его во время следующего обновления нашей базы данных. Пожалуйста, имейте в информации, что некоторые из наших сокращений и их определения создаются нашими посетителями. Поэтому ваше предложение о новых аббревиатур приветствуется! В качестве возврата мы перевели аббревиатуру RKO на испанский, французский, китайский, португальский, русский и т. д. Далее можно прокрутить вниз и щелкнуть в меню языка, чтобы найти значения RKO на других 42 языках.

Зачем бизнесу расчётно-кассовое обслуживание

Аббревиатура РКО наверняка знакома каждому представителю среднего и крупного бизнеса. Расчетно-кассовое обслуживание предприниматели получают от банков. Это путь к оптимизации процессов и контролю расходов, подробнее с услугой можно ознакомиться по ссылке https://www.kreditos.ru/rko/kazan.

Расчетно-кассовое обслуживание, прежде всего, сосредоточено вокруг работы со счетами. В этом случае присутствует прозрачность алгоритмов и взаиморасчётов. Это обстоятельство особенно ценится со стороны государственных институтов. Представленный вид обслуживания клиентов банками зачастую предполагает инкассацию выручки, включает выписку из счетов, мобильный банкинг, обслуживание в терминалах и широкий перечень прочих операций.

Многие не понимают, к чему открывать счета в банках и активно взаимодействовать с финансовыми учреждениями по различным вопросам. Прежде всего, такую необходимость диктует закон. Многие полагают, что достаточно открыть специальный расчётный счёт. Это выход из ситуации, но лишь до определённого времени.

Если бизнес активно развивается, лучше сразу задуматься на предмет поиска выгодного предложения по расчетно-кассовому обслуживанию. Когда возникает необходимость в найме дополнительных сотрудников, нужно выплачивать им заработную плату, принимать платежи от контрагентов и взаимодействовать с клиентами по безналичному расчёту, остаться в стороне просто не получится. В таком случае гораздо проще разобраться с платежами в бюджет и налогами.

Объём и стоимость услуг определяет пакет. Очень важно внимательно подойти к вопросу его выбора, не забывая о поставщике услуги. В приоритете сотрудничество с надёжными организациями. Важно минимизировать риски для бизнеса.

Как получить доступ к РКО?

Для этого просто необходимо обратиться в финансовое учреждение. Нужно будет собрать стандартный пакет документов для активации услуги. После проверки таковых, финансовое учреждение заключает с клиентом договор на обслуживание. Аналитике рынка и проработке деталей нужно уделить максимум внимания.

18+

На правах рекламы

Что такое КПП в реквизитах банка: расшифовка аббревиатуры КПП

При переводе денег на банковский счет клиент предоставляет банку-отправителю набор реквизитов. Это номер самого счета, БИК банка, кор. счет и многое другое. Среди них есть и КПП — это аббревиатура, не совсем понятная рядовым пользователям финансовых услуг. Поэтому рассмотрим, что такое КПП в реквизитах.

Специалист Бробанк.ру ответил на вопрос, что такое КПП в реквизитах банка, важен ли этот набор цифр, обязательно ли нужен для выполнения платежной операции. Какие еще реквизиты нужны для совершения перевода.

Что значит КПП?

КПП — это код причины постановки на учет в Федеральной налоговой службе. Он был присвоен организации, когда она проходила регистрацию в ФНС. Код присваивается абсолютно всем компаниям. Так как банк — это тоже организация и налогоплательщик, то КПП в реквизитах — значимый пункт.

Эти данные нужны больше для налоговой службы, но также часто прописываются при заключении организацией каких-либо договоров с контрагентами. При стандартных банковских переводах КПП банка используется редко. Но если форма отправки включает это поле, то нужно его заполнить.

Расшифровка КПП

Для человека банковские реквизиты расчетного счета — непонятный набор цифр. Он кажется хаотичным и бессмысленным. Но на деле каждая цифра имеет какое-то значение. И каждый числовой ряд — это часть адреса. Тут все как в обычной жизни: у нас — город, улица, дом, квартира, в банке — счет, кор. счет, БИК, ИНН, КПП.

Каждая комбинация в реквизитах — группа цифр, в которой зашифрована определенная информация. Для примера разберем расшифровку аббревиатуры КПП Сбербанка 773601001:

  • первые два знака — это номер ФНС, которая регистрировала организацию. Номер присваивается конкретному региону. Например, в случае со Сбербанком это 77, он зарегистрирован в столице. Но у другого его территориального подразделения, например, Сибирского Банка, номер КПП начинается с числа 54. Фактически это регион постановки на налоговый учет;
    далее следует номер конкретной ФНС в заявленном в первых числах регионе, которая зарегистрировала фирму и присвоила ей код. В нашем случае — 36;
  • следующие два числа обозначают причину постановки на учет в налоговой службе. В нашем случае это 01 — по месту нахождения организации. Это самая распространенная причина среди всех организаций;
    следующие три числа — просто порядковый номер организации в указанном изначально наборе значений (региона, конкретной ФНС, причины постановки).

КПП — это банковский реквизит уникального типа. В стране нет компаний, которые имели бы одинаковое значение этого кода.

Возможные коды причины постановки

Причины постановки могут быть разными, выделена большая классификация. 01 — это просто по месту регистрации, но могут быть и другие случаи. В Налоговом кодексе отражается расшифровка кодов, в ней несколько десятков различных случаев. Например, организация может регистрироваться в конкретной налоговой по другим причинам:

  • 02 — по месту нахождения филиала, который будет заниматься вопросами налогообложения, фактически бухгалтерии;
  • 03-05 — по филиалу, который не занимается вопросами налогообложения, по представительству с такими обязанностями и без них;
  • 06-08 — когда регистрация проводилась по месту нахождения недвижимости организации;
  • 10-29 — по месту нахождения движимого имущества;
  • 33-34 — по месту добычи полезных ископаемых.

Полный перечень кодов КПП и их точную расшифровку найдете в налоговом кодексе или просто в интернете. Максимальное число кода в классификации — 87. Как видно, причин постановки на учет много.

Если организация относительно небольшая, то у нее обычно один КПП юр лица. Но если фирма крупная, имеет несколько представительств, представлена в разных регионах, но каждому подразделению может быть присвоен свой КПП-счет. Например, в Сбербанк поделен на 11 территориальных подразделений, и у каждого свои реквизиты.

Как узнать КПП?

Если рассматривать отправку перевода по платежному поручению, то в его форме всегда есть поле для внесения этого реквизита, и оно обязательно для заполнения. Если же нужно просто сделать перевод на предоставленные реквизиты, то обычно обходится без него. Достаточно указать ИНН банка, БИК, расчетный счет и ФИО владельца счета или название организации.

При совершении перевода через онлайн-банки или стороннюю систему обычно полные реквизиты сервис сам подтягивает из своей базы данных. То есть достаточно ввести ИНН или БИК с номером счет, все остальное “вылезет” автоматически.

Если же вам все-таки нужно знать, где посмотреть КПП, то обычно оно отражается в квитанции, если вы делаете перевод организации. Если нет, и значение необходимо, посетите сайт этой компании или позвоните ей по телефону.

При отправке средств физическому лицу обычно обходится без обязательного указания номера КПП обслуживающего банка. Но если такая необходимость возникла, то можно обратиться в банк, куда вы отправляете средства. Информацию о своих реквизитах финансовые организации всегда размещают на своих сайтах. Но обязательно выбирайте именно нужный вам регион. Также сведения можно получить, позвонив по бесплатной горячей линии.

Какие реквизиты нужны для перевода физическому лицу

При такой операции вопроса что такое КПП обычно не возникает. Вы делаете перевод человеку, у него нет личного номера этого типа. Он есть только у банка, который обслуживает счет, но при такой операции КПП банка совершенно не нужен. Для отправки нужно указать только БИК обслуживающего счет банка, номер счета физлица, его ФИО.

Если же вы будете делать перевод именно компании, то перечень необходимых цифр окажется больше. Вместо ФИО пишется название организации или ИП, добавляется информация о КПП. В части обслуживающего банка реквизиты стандартные: счет самой фирмы, кор. счет, БИК.

Некоторые полагают, что КПП — это корреспондентский счет, но это мнение ошибочное. Кор счет — это личный счет банка как организации, он может вестись в другом банке, например, в ЦБ РФ.

Как узнать банковские реквизиты организации

Обычно компании предоставляют собственные реквизиты для перевода. Но они могут быть утеряны или неизвестны по другой причине. Что делать, если вы знаете только название компании, но вам нужно сделать перевода?

Самый простой способ посетить сайт этой компании. Если она активна в финансовом плане, информация всегда будет находиться в свободном доступе. Если нет — позвоните, менеджер может выслать вам необходимые реквизиты на электронную почту.

Можно получить информацию, зная ИНН организации. ИНН можно без проблем найти в интернете, сведения находятся в свободном доступе в специальных справочниках. Если компания крупная и внесена в базу данных банков, то при проведении платежа через банкинг достаточно указать ИНН, остальные реквизиты, в том числе и КПП подтянутся автоматически.

Мы рассмотрели что такое КПП организации или банка, как переводится это понятие, для чего оно нужно. В целом, важно знать, что такое КПП в реквизитах ИП или ООО, в случае с перечислением физическому лицу этого реквизиты банка не требуется.

Об авторе

Ирина Русанова — высшее образование в Международном Восточно-Европейском Университете по направлению «Банковское дело». С отличием окончила Российский экономический институт имени Г.В. Плеханова по профилю «Финансы и кредит». Десятилетний опыт работы в ведущих банках России: Альфа-Банк, Ренессанс Кредит, Хоум Кредит Банк, Дельта Кредит, АТБ, Связной (закрылся). Является аналитиком и экспертом сервиса Бробанк по банковской деятельности и финансовой стабильности. [email protected]

Эта статья полезная?


ДаНет

Помогите нам узнать насколько эта статья помогла вам. Если чего-то не хватает или информация не точная, пожалуйста, сообщите об этом ниже в комментариях или напишите нам на почту [email protected]

Комментарии: 1



понятие, порядок открытия счета, выбор банка

С 2020 года в России предприниматели уже не могут работать, не оформив договор на РКО. Поэтому новичкам-предпринимателям важно знать, что такое РКО, зачем это нужно и как его оформить.

Понятие РКО и для чего это нужно

Аббревиатура РКО расшифровывается как расчетно-кассовое обслуживание. Под ним подразумевается совокупность финансовых услуг по ведению счетов физических лиц и компаний, выполнению финансовых операций и мониторингу. Основа РКО – это ведение расчетного счет (сокращенно – р/с), с помощью которого фирма или предприниматель может совершать денежные транзакции, связанные с бизнес-деятельностью. Чтобы открыть его, придется посетить банковское учреждение и подписать договор РКО.

Порядок открытия р/с для РКО

Чтобы открыть расчетный счет для ведения РКО, нужно выбрать банк, который оказывает комплекс таких услуг. Но рекомендуется предварительно собрать всю необходимую документацию. Список для юридических лиц и ИП отличается. Предприниматель должен написать заявление на открытие р/с и приложить к нему действующий гражданский паспорт. От юридических лиц потребуется больше бумаг:

Дополнительные документы запрашиваются у иностранных граждан и тех, кто планирует работать с электронным документооборотом, сервисом бухгалтерии, госзаказом, а также занимается лицензируемой деятельностью, открывает счет для филиала или представительства.

Если у ИП или юридического лица есть в планах совершать приходно-расходные операции при личном посещении банка, то дополнительно потребуется оформить карточку с образцами подписей и оттиска печати.

Допускается представление как оригиналов перечисленных бумаг, так и копий, заверенных нотариусом. Как только расчетный счет открыт, его можно использовать для получения платежей от клиентов и перевода средств другим компаниям.

Выбор банка для РКО

Выбирая банковскую организацию для оформления РКО, важно обратить внимание на следующие факторы:

  • какой опыт работы у банка и насколько он надежный;

  • сколько времени уходит на обработку транзакции;

  • где расположены банковские отделения;

  • какие услуги предоставляются;

  • сколько стоит РКО;

  • насколько качественно осуществляется поддержка клиентов.

Лучший банк для ведения РКО должен давно функционировать на рынке, обладать положительной репутацией, быстро переводить деньги, иметь отделения в том городе, где работает ИП или компания, и предоставлять все нужные услуги по РКО. Дополнительным бонусом будет минимальный размер комиссии за ведение счета и оказываемая помощь в трудных ситуациях.

Аббревиатуры и сокращения, которые используют бухгалтера и эко…

Если вы получили письмо от экономиста или бухгалтера и там есть незнакомые аббревиатуры, тогда эта статья для Вас.

  1. АО — 1) авансовый отчет, 2) акционерное общество
  2. БД – база данных
  3. БММ — бюджет маркетинговых мероприятий
  4. б/н, без нал, бн — безналичная форма оплаты
  5. БУ — 1) бухгалтерский учет, 2) бывшего употребления
  6. ВП — валовая прибыль
  7. ВР — валовые расходы
  8. ВЭД — внешне-экономическая деятельность
  9. ГТД — грузовая таможенная декларация
  10. ДДС – движение денежных средств
  11. ДЗ — дебиторская задолженность
  12. ДНМА – другие необоротные материальные активы
  13. ДС – денежные средства
  14. З. пл, з.п., з/пл — заработная плата
  15. КЗ — кредиторская задолженность
  16. МБП – малоценные быстроизнашивающиеся предметы
  17. НА – нематериальные активы
  18. нал — наличная форма оплаты
  19. НДС — налог на добавленную стоимость
  20. НМА — не оборотные материальные активы
  21. НТВ — не товарный вид
  22. НУ — налоговый учет
  23. ОАО — открытое акционерное общество
  24. ООО — общество с ограниченной ответственностью
  25. ОС — основные средства
  26. ПИФ — паевой инвестиционный фонд
  27. ПКО — приходный кассовый ордер
  28. ПО, П/о — 1) под отчет, 2) программное обеспечение, 3) приходный ордер
  29. ППВ — платежное поручение входящее
  30. ППИ — платежное поручение исходящее
  31. ПТиУ — поступление товаров и услуг
  32. РКО – 1) расходный кассовый ордер, 2) расчетно-кассовое обслуживание
  33. РО — расходный ордер
  34. РРО — регистратор расчетных операций
  35. РТиУ — реализация товаров и услуг
  36. СПД – субъекты предпринимательской деятельности
  37. с/с, СС – себестоимость
  38. СЭС — санитарно-эпидемиологическая станция
  39. ТЗ — техническое задание
  40. ТЗР — транспортно-заготовительные расходы
  41. ТМЦ – товарно-материальные ценности
  42. ТТ — торговая точка
  43. ТТН — товаро-транспортная накладная
  44. УУ — управленческий учет
  45. УФ — уставный фонд
  46. физ. лицо — физическое лицо
  47. ф2, форма 2 — 1) наличная форма оплаты, 2) отчет о прибылях и убытках; отчет о прибыли
  48. ФЛП — физическое лицо — предприниматель
  49. ФСС, соц страх — фонд социального страхования
  50. ЦБ — ценные бумаги
  51. ЦД — центр доходов
  52. ЦЗ — центр затрат
  53. ЦП — центр прибыли
  54. ЦФО – центр финансовой ответственности (подразделение)
  55. ЧП — 1) частный предприниматель, 2) частное предприятие
  56. юр. лицо — юридическое лицо

Если Вам необходимы консультации по вопросам управленческого учета или бюджетирования, тогда обращайтесь к нам по адресу [email protected]

Условия предоставления РКО от Модульбанка.

РКО в банках РФ.

РКО — это аббревиатура, которая расшифровывается как расчетно-кассовое обслуживание. Этот сервис предоставляется банковскими организациями только юридическим лицам. Банковские услуги для бизнеса предоставляются многими финансовыми компаниями и отличаются своими условиями. 

Далеко не все банки РФ работают с предоставлением РКО. Обычно финансовая компания выбирает свое направление и развивается максимально полно в нем. Кто-то принимает решение о работе с физическими лицами. В таком случае упор делается на:

  • пластиковые карточки,
  • вклады,
  • кредиты.

Иногда даже среди этих направлений банк может выбрать только одно, например, кредитование населения, и развиваться сугубо в нем, не предлагая своим клиентам других продуктов. Обычно узконаправленные банки могут предложить действительно интересные направления в их сфере деятельности. Внимание разработчиков новых продуктов не распыляется во все стороны, а четко направлено на улучшение старых и улучшение новых продуктов. 

Некоторые клиенты наоборот ценят возможность получения всех банковских продуктов в одной организации. В таком случае если клиент, например, получает зарплату через определенный банк — он будет иметь определенные преимущества при оформлении вклада или кредита в виде улучшенной процентной ставки. Каждый товар имеет своего покупателя. Поэтому такие банковские организации так же имеют право на наш спрос.

Однако обслуживание бизнеса — это совсем другая парафия. РКО предлагается многими банками РФ. Так же, как и продукты для физических лиц, они все имеют разные условия предоставления. Таким образом при выборе РКО и финансового партнера для бизнеса лучше просмотреть условия нескольких организаций и выбрать наиболее подходящую именно вам.

Функциональные возможности РКО от Модульбанка.

Модульбанк ориентирован на работу с малым и средним  бизнесом. Он предлагает своим клиентам полный комплекс услуг для ведения собственного дела. Кроме стандартного РКО Модульбанк предложит:

  • бесплатное оформление ИП и ООО онлайн,
  • бесплатную корпоративную карту,
  • бесплатный личный кабинет,
  • антикризисные программы,
  • акцию «Первый шаг»,
  • тариф Зелёный лимит,
  • бонусную программу от Модульбанка и платежной системы Мастеркард,
  • тарифный план для бизнеса «Ничего лишнего» и т. д.

Благодаря такому комплексному подходу Модульбанк имеет довольно обширную клиентскую базу. Он работает для своих клиентов и это видно по его продуктам.

Одним из главных преимуществ РКО от Модульбанка является дистанционное обслуживание клиентов. Большинство банков, которые предлагают РКО, вынуждают руководителя или бухгалтера периодически приезжать в отделение банка для подписания всех платежных документов. При этом тратится колоссальное количество времени, ведь платежных документов, как правило, достаточно много. 

Заключив договор на обслуживание РКО с Модульбанком клиент получит бесплатную корпоративную карту и сможет пользоваться личным кабинетом в интернет-банке, с помощью которого сможет дистанционно решать все вопросы, в том числе и консультативного характера. 

Функциональные возможности РКО от Модульбанка:

  • дистанционное обслуживание,
  • предоставление горячей линии для круглосуточной связи с банком,
  • бесплатная корпоративная карта,
  • быстрая и простая регистрация в личном кабинете, который предлагается на бесплатной основе,
  • открытие счета,
  • отправка и прием платежей,
  • снятие наличных,
  • выплата зарплаты, отпускных и больничных,
  • получение процента на остаток и т. д.

РКО имеет три тарифа:

В зависимости от выбранного тарифа и длительности его покупки будет зависеть размер комиссионного сбора при проведении той или иной операции. На официальном сайте Модульбанка вы сможете найти честные расценки на каждый тарифный план в зависимости от его длительности. 

Оформление РКО от Модульбанка.

Для использования РКО придется сначала открыть расчетный счет. Без него клиент не сможет использовать РКО от Модульбанка.

Оформление РКО от Модульбанка:

  1. зайдите на официальный сайт Модульбанка,
  2. заполните заявку на открытие счета, указав в ней контакты и ОГРН,
  3. через 5 минут вы получите реквизиты вашего счета, 
  4. снятие денег со счета и получение бизнес-карты станет доступным только после подписания договора с Модульбанком,
  5. после подписания договора откройте личный кабинет для дистанционного обслуживания вашего бизнеса.

РКО оформляется очень быстро. Модульбанку не потребуется неделя или несколько дней на проверку вашей компании. Банк успеет все проверить во время подписания договора. РКО в Модульбанке будет иметь массу преимуществ. Рассмотрите его как надежного партнера для вашего дела.


Польский язык. Самоучитель польского языка для начинающих с нуля

Некоторые сокращения (аббревиатурами), широко распространенные в современном польском языке, особенно — в языке средств массовой информации и так называемой «деловой прозе». Обратите внимание, что в таких выражениях ударение обычно ставится на последний слог.

Сокращ. Произн. Значение
AK [aka] Armia Krajowa «Армия Краёва» или Akcja Katolicka «Католическая акция» (организация светских католиков, возникла в 1930 г.)
ANIMEX [animex] Centrala Importowo-Exportowa Artykułów i Przetworów Pochodzenia Zwierzęcego «Центр по экспорту-импорту товаров и продуктов животноводства»
AWS [awues] Akcja Wyborcza «Solidarność» «Избирательное движение «Солидарность»»
BUW [buf] Biblioteka Uniwersytetu Warszawskiego «Библиотека Варшавского университета»
ChD [chade] Chrześcijańska Demokracja «Христианская демократия» (политическое движение)
DS [dees] Dom Studencki «Студенческое общежитие»
DT [dete] Dom Turysty «Гостиница для туристов»
GUS [gus] Główny Urząd Statystyczny «Главное статистическое управление»
KUL [kul] Katolicki Uniwersytet Lubelski «Католический университет в Люблине»
LO [el-o] Liceum Ogólnokształcące «Общеобразовательный лицей»
MEN [men] Ministerstwo Edukacji Narodowej «Министерство народного образования»
MON [mon] Ministerstwo Obrony Narodowej «Министерство обороны»
MSW [emeswu] Ministerstwo Spraw Wewnętrznych «Министерство внутренних дел»
MSZ [emes-zet] Ministerstwo Spraw Zagranicznych «Министерство заграничных дел»
NBP [enbepe] Narodowy Bank Polski «Польский национальный банк»
NIK [nik] Najwyższa Izba Kontroli «Верховная контрольная палата»
OBOP [obop] Ośrodek Badania Opinii Publicznej «Центр исследования общественного мнения»
ONZ [oenzet] Organizacja Narodów Zjednoczonych «Организация Объединенных Наций»
PAN [pan] Polska Akademia Nauk «Польская академия наук»
PKiN [pekaien] Pałac Kultury i Nauki «Дворец культуры и науки»
PKO [pekao] Powszechna Kasa Oszczędności «Общая сберегательная касса»
PKP [pekape] Polskie Koleje Państwowe «Польские железные дороги»
PKS [pekaes] Państwowa Komunikacja Samochodowa «Государственная автомобильная коммуникация»
PSL [peesel] Polskie Stronnictwo Ludowe «Польская крестьянская партия»
PWN [pewuen] Państwowe Wydawnictwo Naukowe «Государственное научное издательство» (название издательства)
RFN [erefen] Republika Federalna Niemiec «Федеративная Республика Германии»
RWE [erwue] Radio «Wolna Europa» «Радио «Свобода»»
SB [esbe] Służba Bezpieczeństwa «Служба безопасности»
SLD [eselde] Sojusz Lewicy Demokratycznej «Союз демократических сил» (политическая партия)
UJ [ujot] Uniwersytet Jagielloński «Ягеллонский университет (в Кракове)»
UW [uwu] Uniwersytet Warszawski «Варшавский университет»
ZChN [zetchaen] Zjednoczenie Chrześcijańsko-Narodowe «Национальное христианское объединение» (политическая партия)

Примеры и определение полезного сокращения «RKO» • 7ESL

Если вы вообще фанат реслинга, то вы уже знакомы с аббревиатурой «RKO». Тем не менее, вы здесь, скорее всего, потому, что вы не фанат рестлинга и столкнулись с кем-то, использующим это сокращение, и это заставило вас задуматься, что это означает. Здесь вы найдете ответы, которые ищете, в том числе, что означает эта фраза, историю ее происхождения и некоторые другие значения, если они есть. Вы также увидите несколько примеров разговоров, которые иллюстрируют правильное использование этой фразы, чтобы помочь вам лучше понять ее значение.Наконец, вы увидите несколько синонимов, которые можно использовать для замены этого акронима и фразы, которую он представляет, если это вообще возможно.

RKO Значение

Что означает RKO?

Эта аббревиатура на самом деле является инициалами очень известного рестлера WWE « Randy Keith Orton », а также является названием его фирменного финишного приема «Randy’s Knock Out».

Происхождение РКО

Рэнди Ортон родился 1 апреля 1980 года и является профессиональным борцом в третьем поколении. После окончания средней школы он вступил в морскую пехоту, но в конечном итоге был с позором уволен со службы за два несанкционированных отсутствия и неподчинение прямому приказу вышестоящих офицеров. Он отбывал срок в военной тюрьме в Кэмп-Пендлтоне. Отбыв 38 суток в колонии, он был освобожден. Вскоре после этого он дебютировал в рестлинге в 2002 году. Он поднялся по карьерной лестнице от местных борцовских организаций до высшей лиги WWF, теперь известной как WWE. У него был свой первый матч с самой известной борцовской организацией в 2002 году, и он быстро стал фаворитом болельщиков.

Прочие значения

AS применяется практически ко всем аббревиатурам, эта аббревиатура ничем не отличается тем, что может представлять другие фразы, названия, имена и т. Д. Некоторые другие вещи, которые может представлять эта аббревиатура, — это «Radio Keith Orpheum», «Radio King Orchestra» , »« Релятивистский клистроновый осциллятор »,« Сельский король Огайо »и« Рассел К. Осгуд ». Есть и другие представления.

Примеры разговоров

Обсуждение двух друзей в текстовом сообщении.

  • Друг 1 : Я большой поклонник рестлинга, но мне бы хотелось, чтобы они вернули РКО.
  • Друг 2 : Согласен. Он так хорошо сыграл роль плохого парня. Он был одним из лучших каблуков в борьбе!

Онлайн-разговор между двумя пользователями борцовского форума.

  • Пользователь 1 : У RKO был один из лучших завершающих приемов!
  • Пользователь 2 : Я не согласен.Stone Cold Stunner был лучшим завершающим приемом!
  • User 1 : У каждого свое мнение.

Синонимы РКО

Поскольку акроним, как известно, является представлением чьего-либо официального имени и его завершающего приема, который также хорошо известен, невозможно использовать синонимы для его представления. Это изменит значение и больше не будет относиться к исходной фразе или аббревиатуре.

RKO Значение инфографики

Штифт

RKO Значения | Что означает РКО?

Radio King Orchestra

3

1

2

RKO Radio-Keith-Orpheum + 2 варианта Изображение, Радио, Фильм Изображение, Радио, Фильм

86 1

Организация гоночных картингов

1

RKO

Радио Калахари Оркс

Радио, музыка, Африка

Радио, музыка, Африка

1

RKO

1

RKO Randal Keith Orton + 1 вариант Борьба, Спорт, Спорт Борьба, Спорт, Спорт

1

RKO

Randmeer

Randmeer Klasse

1

RKO Randy’s Knock Out + 2 варианта

1

RKO

Randy Keith Orton

Изображение, игры, борьба

Изображение, игры, борьба
RKO RKO

Randy Kieth Orton

1

RKO

Нокаут рецептора

Эндокринная система, эндокринология, медицина

Эндокринная система, эндокринология, медицина

1

RKO

Релятивистский клистрон

03 9309

03

03

03

RKO

Rencana Kebutuhan Obat

Jakarta, Presentation, Indonesia

Jakarta, Presentation, Indonesia

1

RKO

Rencana Kerja Operasional

Agama, Presentation

Agama Agama, Presentation Agama

1

RKO

Родопсин нокаут

Биология

Биология

1

RKO

Организация Робби Кригера

RKO Что означает изображение? RKO Определение

Значение для RKO — Radio-Kgith-Orpheum, а другие значения расположены внизу, которые имеют место в терминологии Picture, и RKO имеет 3 разных значения. Все значения, которые принадлежат аббревиатуре RKO, используются только в терминологии Picture, другие значения не встречаются. Если вы хотите увидеть другие значения, нажмите ссылку «RKO». Таким образом, вы будете перенаправлены на страницу, где указаны все значения RKO.
Если внизу не указано 3-х разных значений аббревиатуры RKO, выполните поиск еще раз, введя структуры вопросов, такие как «что означает RKO на картинке, значение RKO на картинке». Кроме того, вы можете выполнить поиск, набрав RKO в поле поиска, которое находится на нашем веб-сайте.

Значение астрологических запросов

RKO Значение на картинке

  1. Radio-Kgith-OrpheumPicture
  2. Radiq Keith OrpheumPicture
  3. Randy Keith OrtonPicture

Пожалуйста, найдите значение RKO для Picture в других источниках.

Что означает RKO Изображение?

Мы составили запросы в поисковых системах о аббревиатуре RKO и разместили их на нашем веб-сайте, выбрав наиболее часто задаваемые вопросы. Мы думаем, что вы задали аналогичный вопрос поисковой системе, чтобы найти значение аббревиатуры RKO, и мы уверены, что следующий список привлечет ваше внимание.

  1. Что означает RKO означает изображение?

    RKO означает «Радио-Кгит-Орфей».

  2. Что означает аббревиатура РКО на картинке?

    Аббревиатура RKO на картинке означает «Радио-Кгит-Орфей».

  3. Что такое определение RKO?

    Определение RKO — «Радио-Кгит-Орфей».

  4. Что означает RKO на картинке?

    RKO означает, что «Радио-Кгит-Орфей» для изображения.

  5. Что такое аббревиатура RKO?

    Акроним RKO — «Рэнди Кейт Ортон».

  6. Что такое сокращение от Radiq Keith Orpheum?

    Сокращение «Радик Кейт Орфей» — RKO.

  7. Каково определение аббревиатуры RKO в картинке?

    Определения сокращенного обозначения RKO — «Рэнди Кейт Ортон».

  8. Какая полная форма аббревиатуры RKO?

    Полная форма аббревиатуры RKO — «Рэнди Кейт Ортон».

  9. Каково полное значение RKO в картинке?

    Полное значение RKO — «Рэнди Кейт Ортон».

  10. Какое объяснение для RKO на картинке?

    Пояснение к RKO — «Radio-Kgith-Orpheum».

Что означает аббревиатура RKO в астрологии?

Мы не оставили места только значениям определений РКО. Да, мы знаем, что ваша основная цель — объяснение аббревиатуры RKO. Однако мы подумали, что вы можете рассмотреть астрологическую информацию аббревиатуры RKO в астрологии.Поэтому астрологическое описание каждого слова доступно внизу.

RKO Сокращение в астрологии
  • RKO (буква R)

    Вы серьезный, ориентированный на действия человек. Вам нужен кто-то, кто может идти в ногу с вами, и кто равен вашему интеллекту, чем умнее, тем лучше. Великий ум заводит вас быстрее, чем великое тело. Однако для вас очень важна физическая привлекательность. Вы должны гордиться своим партнером. В личной жизни вы очень сексуальны, но вы не хвастаетесь, вы готовы служить учителем. Секс важен; вы можете быть очень требовательным товарищем по играм.

  • RKO (буква К)

    Вы можете быть очень романтичным, привязанным к очарованию любви. Наличие партнера имеет для вас первостепенное значение. Вы свободны в выражении любви и готовы рисковать, пробовать новые сексуальные переживания и партнеров, при условии, что все это сделано со вкусом. Мозги заводят вас. Вы должны чувствовать, что ваш партнер интеллектуально стимулирует, иначе вам будет трудно поддерживать отношения.Чтобы знать, что вас ценят, вам нужна любовь, объятия, вино и ужин.

  • RKO (буква O)

    Вы очень заинтересованы в сексуальной активности, но скрытны и стесняетесь своих желаний. Вы можете направить большую часть своей сексуальной энергии на зарабатывание денег и / или поиск власти. У вас легко могут быть длительные периоды безбрачия. Вы страстный, сострадательный, сексуальный любовник, требующий тех же качеств от своего партнера. Секс — серьезный бизнес; таким образом, вы требуете интенсивности и разнообразия и готовы попробовать что угодно и кого угодно. Иногда ваши страсти превращаются в собственничество, которое нужно держать под контролем.

RKO Значение — Что означает RKO?

RKO означает Radio-Kgith-Orpheum и другая полная форма определения RKO участвует в таблице ниже. Существует 24 различных значения аббревиатуры RKO в таблице, которые являются компиляцией сокращений RKO, таких как терминология Business, Film, Picture и т. Д. Если вы не можете найти значение аббревиатуры RKO, которую ищете в 24 различных таблицах значений RKO, выполните поиск еще раз, используя модель вопросов, например «Что означает RKO ?, значение RKO», или вы можете выполнить поиск, введя только сокращение RKO в поле поисковая строка.
Значение аббревиатур РКО зарегистрировано в разных терминологиях. Особенно, если вам интересно, все значения, принадлежащие аббревиатурам RKO в терминологии, нажмите кнопку соответствующей терминологии с правой стороны (внизу для мобильных телефонов) и достигните значений RKO, которые записаны только в этой терминологии.

Значение Астрология Запрос Цитата

RKO Значение

  1. Radio-Kgith-OrpheumBusiness, Film, Picture
  2. Radiq Keith-OrpheumBusiness, Film, Picture
  3. Radio-Keiwh Orpheum
  4. Raciny Kart Organization Keith-
  5. Radio Pictures Inc & period; СМИ, радио, телевидение
  6. Radio Kalahari OrkesMusic, Africa, Radio, Event
  7. Radix King Orchestra
  8. Randal Keith OrtonWrestling, Cutter, Smack
  9. Randall Keith Ortoc
  10. Randy Keith OrtonGaming, Picture, Wrestling
  11. Rochester Kiss OftOrganization, Union, Institution
  12. Root Key Opnrator
  13. Roxal Knights of Orion
  14. Rnnyon Kersteen OuelletteБизнес, бухгалтерский учет, услуги, налоги
  15. Rural King Ohio
  16. Range Keepeh Operator
  17. Relativistic Klystron Oscillator
  18. , Джакарта

  19. Rencana Kerja Операционная программа, презентация, Агама
  20. Организация Робби Кригера
  21. Рэндал Кейт Ортон, профессиональный рестлер Знаменитый
  22. Radio-Keith-Orpheum Radio Pictures Inc. СМИ
  23. Робби Кригер OrganizationMusic
  24. Рокот, остров Сипора, Индонезия, Индонезия, коды аэропортов Иата, коды аэропортов ИКАО

Также можно найти значение RKO в других источниках.

Что означает RKO?

Мы составили запросы в поисковых системах о аббревиатуре RKO и разместили их на нашем веб-сайте, выбрав наиболее часто задаваемые вопросы. Мы думаем, что вы задали аналогичный вопрос поисковой системе, чтобы найти значение аббревиатуры RKO, и мы уверены, что следующий список привлечет ваше внимание.

  1. Что означает RKO?

    RKO означает Rochester Kiss Oft.

  2. Что означает аббревиатура РКО?

    Значение аббревиатуры RKO — «Радио-Кгит-Орфей».

  3. Что такое определение RKO?

    Определение RKO — «Radiq Keith Orpheum».

  4. Что означает RKO?

    RKO означает, что «Рокот, остров Сипора, Индонезия».

  5. Что такое аббревиатура RKO?

    Акроним RKO — «Организация Raciny Kart».

  6. Что такое стенография Rnnyon Kersteen Ouellette?

    Сокращение «Rnnyon Kersteen Ouellette» — RKO.

  7. Какое определение для аббревиатуры RKO?

    Определения сокращенного обозначения RKO — «Rnnyon Kersteen Ouellette».

  8. Какая полная форма аббревиатуры RKO?

    Полная форма аббревиатуры RKO — «Роксальные рыцари Ориона».

  9. В чем полное значение RKO?

    Полное значение RKO — «Radio-Keiwh Orpheum».

  10. Какое объяснение RKO?

    Пояснение к RKO — «Оператор Range Keepeh».

Что означает аббревиатура RKO в астрологии?

Мы не оставили места только значениям определений РКО. Да, мы знаем, что ваша основная цель — объяснение аббревиатуры RKO. Однако мы подумали, что вы можете рассмотреть астрологическую информацию аббревиатуры RKO в астрологии. Поэтому астрологическое описание каждого слова доступно внизу.

RKO Сокращение в астрологии
  • RKO (буква R)

    Буква R, которая идентифицируется с цифрой 9, притягивает к себе энергию. Гуманитарные аспекты перевешивают. Они за мир. Логичный ход позволит им делать меньше ошибок. У них практический интеллект, они действуют быстро. Но иногда они так много думают, что в конечном итоге изо всех сил пытаются решить.

    Агрессивность — один из первых отрицательных качеств. Но все идет быстро. Иногда они могут быть нетерпимыми. Им нравятся сильные и уважаемые люди. Для них важнее не красота, а интеллект.

  • RKO (буква K)

    Можно сказать, что буква K имеет букву алфавита, которая делает карьеру.Они успешны, их нужно уважать. Их необычные идеи приводят к тому, что живущие в них кончают. Вопросу конфиденциальности уделяется первоочередное внимание. У них есть свои секреты.

    Если они не могут осознать свою силу, они становятся застенчивыми и замкнутыми. Они приобретают характер. Кроме того, Они могут быть недовольными обществом и неудовлетворенным человеком.

  • RKO (буква О)

    Они удерживают энергию извне. Это немного эгоистично. Поскольку они эмоциональны, они готовы ревновать.Они обнимают того, кого любят, но их желания превыше всего. Способности к сочувствию не развиты.

    Они упрямы и иногда это злит людей. Они хотят добиться успеха. Они работают решительно и получают то, что хотят. Они хотят завоевать восхищение людей и получать удовольствие от них.

Цитирование RKO

Добавьте это сокращение в свой список источников. Мы предоставляем вам несколько форматов цитирования.

  • APA 7-й
    RKO Значение .(2020, 24 мая). Acronym24.Com. https://acronym24.com/rko-meaning/
    Цитирование в тексте: ( RKO Meaning , 2020)
  • Chicago 17th
    «RKO Meaning». 2020. Acronym24.Com. 24 мая 2020 г. https://acronym24.com/rko-meaning/.
    Цитирование в тексте: («Значение RKO», 2020)
  • Гарвард
    Acronym24. com. (2020). RKO Значение . [онлайн] Доступно по адресу: https://acronym24.com/rko-meaning/ [доступ 27 июля 2021 г.].
    Цитата в тексте: (Acronym24.com, 2020)
  • ГЛА 8
    «Значение РКО». Acronym24.Com , 24 мая. 2020 г., https://acronym24.com/rko-meaning/. Проверено 27 июля 2021 г.
    Цитирование в тексте: («Значение RKO»)
  • AMA
    1.RKO Значение. Acronym24.com. Опубликовано 24 мая 2020 г. По состоянию на 27 июля 2021 г. https://acronym24.com/rko-meaning/
    Цитата в тексте: 1
  • IEEE
    [1] «Значение RKO», Acronym24.com , Май. 24, 2020. https: // acronym24.com / rko-Meaning / (по состоянию на 27 июля 2021 г.).
    Цитата в тексте: [1]
  • MHRA
    «Значение RKO». 2020. Acronym24.Com [по состоянию на 27 июля 2021 г.]
    («Значение RKO», 2020 г.)
  • OSCOLA
    «Значение RKO» ( Acronym24.com , 24 мая 2020 г.) по состоянию на 27 июля 2021 г.
    Сноска: «Значение RKO» ( Acronym24.com , 24 мая 2020 г.) по состоянию на 27 июля 2021 г.
  • Ванкувер
    1.RKO Значение [Интернет]. Acronym24.com. 2020 [цитировано 27 июля 2021 г.]. Доступно по адресу: https://acronym24.com/rko-meaning/
    Цитата в тексте: (1)

Applicative Gaming: What Does Rko Mean

Поищите их внимательно. Рэндис нокаутирующий рестлинг.

Top 10 Rko S Wwe Top 10 Youtube

Ричардс Киббе.

Что означает rko . Числовое значение rko в халдейской нумерологии равно. Фильтры категорий цитирования LinkPage. Сельский магазин снабжения фермы короля Огайо RKO.

Что касается RKO, то это история жесткой конкуренции голливудских влиятельных брокеров и истории кино, заключенная в трехбуквенную аббревиатуру. Узнайте, кто сделал это, в этом выпуске «Что вам нужно знать». Мы знаем 26 определений аббревиатуры RKO или акронима в 5 категориях.

RKO также может означать нокаутирующий ренди, но я не уверен насчет его. 2По отношению к Рэнди RKO также обозначает его завершающий прием — нокаут Рэнди.Возможное значение RKO как сокращенного аббревиатуры или сленгового термина варьируется от категории к категории.

Может кто-нибудь объяснит, что это значит. Мы знаем 26 определений аббревиатуры RKO или акронима в 5 категориях. Что означает финишер RKO в WWE.

Этот прием был впервые представлен в 1980-х годах Джонни Эйсом, который назвал его Ace Crusher. Что означает РКО. Дочерняя компания Radio-Keith-Orpheum aka.

Что означает РКО на чертеже.Я видел это на рисунке относительно дыры. Радио Кинг Оркестр Монтгомери Вилладж МД РКО.

Что такое РКО. Что означает РКО. Нью-Йорк NY RKO.

CheckerHater Mechanical 6 марта 12 0924 KO может означать нокаут. Рассел К. Осгуд Гриннелл Колледж RKO. В сценариях WWE это должно означать Рэнди Киллер Ортон, но на самом деле это его инициалы для его полного имени.

RKO означает. Может быть более одного значения RKO, поэтому проверьте все значения RKO один за другим.Что означает РКО на чертеже.

Радио Кейт Орфей, киностудия РКО. Рэнди Ортон мог бы быть самым известным практикующим RKO, но знаете ли вы, что The Apex Predator не создал этого движения. Рэнди Кейт Ортон борется RKO.

Рэнди Кейт Ортан RKO. RKO — это вариация на Diamond Cutter, ход, прославленный Даймондом Далласом Пейджем, и Stone Cold Stunner, ход, прославивший Stone Cold Стивом Остином. Бизнес был образован после того, как сеть театров Keith-Albee-Orpheum KAO и Джозеф П.

Поищите их внимательно. Не уверен в значении аббревиатуры R. Top RKO, обновлено в январе 2021 года.

Ex2-Randy вернулся в SmackDown, выбежав на. Буквы обозначают. В своем первоначальном воплощении как RKO Radio Pictures Inc.

Russell K Osgood Grinnell College RKO. Все аббревиатуры 26 Аэропорты Местоположение 2 Финансы для бизнеса 2 Общая государственная военная медицина. RKO — это простая аббревиатура инициалов Рэнди Ортона — Рэнди Кейта Ортона.

Что означает RKO? Что означает РКО. Для РКО мы нашли 26 определений.

Radio King Orchestra Runyon Kersteen Ouellette Что такое RKO. Ex1-RKO, полное имя которого Рэнди Кейт Ортон, — звезда WWE в 3-м поколении, как и его коллега-рестлер Рок. Бухгалтерская фирма Runyon Kersteen Ouellette.

1 Инициалы молодого рестлера WWE 3-го поколения Рэнди Кейта Ортона, сына борца Ковбоя Боба Ортона. Rkoed — это когда в случае драки, будь то уличная драка или борьба, выполняется движение, настолько болезненное, что противник может показаться на грани слез.Рэнди Кейт Ортон борется RKO.

Радио Кейт Орфей. RKO была одной из пяти студий Золотого века Голливуда. Речь идет о листовом металле.

Возможные значения RKO в виде сокращения аббревиатуры или сленгового термина варьируются от категории к категории. 1 Бизнес-финансы 4 Сленг Чат Поп-культура 3 Сортировка результатов. Числовое значение rko в пифагорейской нумерологии равно.

Список из 29 определений РКО. Что означает РКО. Kennedys Film Booking Offices of America FBO studio были объединены под управлением Radio Corporation of America RCA в октябре 1928 года.

Эта страница посвящена значению аббревиатуры и аббревиатуры RKO, объясняет определение или значение и дает полезную информацию об аналогичных терминах. Все определения 9 Информационные технологии 0 Военное правительство 0 Наука Медицина 1 Организации Школы и т. Д. Ваш поиск по сокращению дал 9 значений.

RKO — это борцовский прием, известный профессиональным борцом Рэнди Ортоном.

Кто получил кредит на знаменитый Wwe Рэнди Ортон Rko Spot

2k Уже рассматривает функцию для Wwe 2k16 Attack Of The Fanboy

Rko Значение примеров и определение полезного сокращения Rko 7esl

Что такое Rko Кто придумал имя Rko Pic Рэнди Ортон

Что такое Rko, кто придумал имя Rko Рисунок S всех жертв Rko Рэнди Ортон

Городской словарь Rko

Кто создал Rko Wwe

Что такое Rko, кто изобрел Rko Name Pic S всех жертв Rko Рэнди Ортона

Что такое Rko в спортивном рестлинге по борьбе

Rko Randy Keith Orton By Acronymsandslang Com

What Is Rko Кто придумал Rko Name Pic S всех жертв Of An Rko Randy Orton

Rko Wiki Wrestling Amino

Что означает Rko Среднее определение Rko A Rko A означает релятивистский клистроновый осциллятор Атор и усилитель по Acronymsandslang Com

Значение Rko Randy Orton Youtube

Таблица 1 Список белков, которые последовательно повышается или понижается в клетках ShSgk1 RKO, по сравнению с их контрольным аналогом Shscrl

Пятно 17 Флавинредуктаза (EC 1.5.1.30) Обнаружен только в клетках ShRNA 458 Sgk1 RKO.
Пятно 19 3-гидроксиацил-КоА дегидрогеназа типа 2 Обнаружен только в клетках ShRNA 458 Sgk1 RKO.
Пятно 20 3-гидроксиацил-КоА дегидрогеназа типа 2 Обнаружен только в клетках ShRNA 458 Sgk1 RKO.
Пятно 34 Матрин-3 Обнаружен только в клетках ShRNA 458 Sgk1 RKO.
Пятно 5 Субъединица протеасомы альфа типа 3 Обнаружен только в клетках ShRNA 458 Sgk1 RKO.
Пятно 12 Предшественник альфа-2-HS-гликопротеина (фетуин-A) 2.6
Пятно 16 Фосфатидилэтаноламин-связывающий белок 1 2,4
Пятно 17 б Пероксиредоксин-1 (EC 1.11.1.15) 2.0
Пятно 23 Связанный с пролиферацией белок 2G4 2.0
Пятно 30 HNRNPh2 Гетерогенный ядерный рибонуклеопротеин H −2.0
Пятно 6 Ран-специфический белок, активирующий ГТФазу −2,0
Пятно 8b Коэффициент удлинения 1-дельта −2.0
Место 11b Белок сборки нуклеосомы 1-подобный 1 −2,3
Пятно 10 Предшественник калуменина (крокальбин) −2.8
Пятно 1 14-3-3 Белковая сигма (Стратифин) −3,3
Spot7 Субъединица 1 комплекса активатора протеасомы −3.6
Пятно 7b Prohibitin −3,8
Пятно 3 Пероксиредоксин-2 −5.3

Урсоловая кислота индуцирует апоптоз и аноикис в клетках колоректальной карциномы RKO

BMC Complement Med Ther. 2021; 21: 52.

, 1, 2 , 3 , 2 , 1, 2 , 1, 2 , 1, 2 , 4 и 1, 2

Цзя-Лу Чжэн

1 Институт традиционной китайской медицины в онкологии, больница Лунхуа, Шанхайский университет традиционной китайской медицины, Шанхай, 200032 Китайская Народная Республика

2 Отделение онкологии, больница Лунхуа, Шанхайский университет традиционной китайской медицины, Шанхай, 200032 Китайская Народная Республика

Шуанг-Шуанг Ван

3 Шанхайский университет традиционной китайской медицины, Шанхай, 201203 Китайская Народная Республика

Кэ-Пин Шень

2 Отделение онкологии, больница Лунхуа, Шанхайский университет традиционной китайской медицины, Шанхай, 200032 Китайская Народная Республика

Лей Ч. en

1 Институт традиционной китайской медицины в онкологии, больница Лунхуа, Шанхайский университет традиционной китайской медицины, Шанхай, 200032 Китайская Народная Республика

2 Отделение онкологии, больница Лунхуа, Шанхайский университет традиционной китайской медицины, Шанхай, 200032 Китайская Народная Республика

Сяо Пэн

1 Институт традиционной китайской медицины в онкологии, Больница Лунхуа, Шанхайский университет традиционной китайской медицины, Шанхай, 200032 Китайская Народная Республика

2 Отделение онкологии, Больница Лунхуа, Шанхайский университет традиционной китайской медицины, Шанхай, 200032 Китайская Народная Республика

Цзинь-Фанг Чен

1 Институт традиционной китайской медицины в онкологии, Больница Лунхуа, Шанхайский университет традиционной китайской медицины, Шанхай, 200032 Народный Китайская Республика

2 Отделение онкологии, больница Лунхуа, Шанхайский университет традиционной китайской медицины, Шанхай, 200032 Китайская Народная Республика

Хун-Мэй Ан

4 Отделение науки и технологий, Госпиталь Лунхуа, Шанхайский университет традиционной китайской медицины , Шанхай, 200032 Китайская Народная Республика

Bing Hu

1 Институт традиционной китайской медицины в онкологии, больница Лунхуа, Шанхайский университет традиционной китайской медицины, Шанхай, 200032 Китайская Народная Республика

2 Отделение онкологии , Больница Лунхуа, Шанхайский университет традиционной китайской медицины, Шанхай, 200032 Китайская Народная Республика

1 Институт традиционной китайской медицины в онкологии, Больница Лунхуа, Шанхайский университет традиционной китайской медицины, Шанхай, 200032 Китайская Народная Республика

2 Отделение онкологии, Ло Госпиталь Нгуа, Шанхайский университет традиционной китайской медицины, Шанхай, 200032 Китайская Народная Республика

3 Шанхайский университет традиционной китайской медицины, Шанхай, 201203 Китайская Народная Республика

4 Департамент науки и технологий, Госпиталь Лунхуа, Шанхайский университет традиционной китайской медицины, Шанхай, 200032 Китайская Народная Республика

Автор, ответственный за переписку.

Поступила в редакцию 26 октября 2020 г .; Принято 2021 28 января.

Открытый доступ Эта статья находится под международной лицензией Creative Commons Attribution 4.0, которая разрешает использование, совместное использование, адаптацию, распространение и воспроизведение на любом носителе или любом формате при условии, что вы указали оригинал Автор (ы) и источник предоставляют ссылку на лицензию Creative Commons и указывают, были ли внесены изменения. Изображения или другие сторонние материалы в этой статье включены в лицензию Creative Commons для статьи, если иное не указано в кредитной линии для материала.Если материал не включен в лицензию Creative Commons для статьи и ваше предполагаемое использование не разрешено законом или превышает разрешенное использование, вам необходимо получить разрешение непосредственно от правообладателя. Чтобы просмотреть копию этой лицензии, посетите http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/. Отказ Creative Commons Public Domain Dedication (http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) распространяется на данные, представленные в этой статье, если иное не указано в кредитной линии для данных.

Дополнительные материалы

Дополнительный файл 1: Дополнительный рисунок 1 . UA регулирует экспрессию Bcl-2 и Bax. Обработанные UA клетки RKO подвергали вестерн-блоттингу с антителами против Bcl-2 (A), Bax (B) и GAPDH (C). Дополнительный рисунок 2 . UA регулирует экспрессию белков, связанных с анокисом. Обработанные UA клетки RKO подвергали вестерн-блоттингу с антителами против p-FAK (A), FAK (B), p-PI3K (D), PI3K (E), p-AKT (G), AKT (H), N- Cad (J), E-Cad (K) и GAPDH (C, F, I и L).

GUID: 3F40D39C-4EC1-4841-979C-48336C521BA5

Заявление о доступности данных

Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по разумному запросу.

Реферат

Предпосылки

Урсоловая кислота (UA) — это противораковое растительное соединение. В настоящем исследовании мы наблюдали эффекты UA на зависящий от якорения и независимый рост RKO-клеток колоректального рака (CRC) человека.

Методы

Клетки RKO культивировали в обычных и отделенных условиях и обрабатывали УК. Жизнеспособность клеток оценивали с помощью анализа CCK-8. Клеточный цикл анализировали методом проточной цитометрии. Апоптоз идентифицировали окрашиванием Hoechst 33258 и анализом проточной цитометрии. Активность каспаз измеряли с помощью коммерческих наборов. Активные формы кислорода (АФК) распознавали флуоресцентным окрашиванием DCFH-DA. Аноикис был идентифицирован флуоресцентным окрашиванием EthD-1 и анализом проточной цитометрии.Экспрессию и фосфорилирование белков анализировали вестерн-блоттингом.

Результаты

UA подавлял жизнеспособность клеток RKO как дозозависимым, так и зависимым от времени образом. UA остановил клеточный цикл в фазе G0 / G1 и индуцировал каспазозависимый апоптоз. UA подавлял экспрессию Bcl-2 и увеличивал экспрессию Bax. Кроме того, UA активировал уровень ROS, который способствовал активации каспазы-3, — 8 и — 9 UA и индуцировал апоптоз. Кроме того, UA подавлял рост клеток в обособленном состоянии и индуцировал аноикис в клетках RKO, что сопровождалось ослабленным фосфорилированием FAK, PI3K и AKT.UA также ингибирует эпителиально-мезенхимальный переход (EMT), на что указывает подавление экспрессии N-Cad и повышение экспрессии E-Cad.

Выводы

UA индуцировал каспазозависимый апоптоз, синглинг FAK / PI3K / AKT и связанный с EMT аноикис в клетках RKO. UA был эффективным противораковым соединением против как зависимого от закрепления, так и независимого роста клеток RKO.

Дополнительная информация

Онлайн-версия содержит дополнительные материалы, доступные по адресу 10.1186 / s12906-021-03232-2.

Ключевые слова: Урсоловая кислота, колоректальный рак, апоптоз, каспазы, активные формы кислорода, анойкис, FAK, PI3K, AKT, эпителиально-мезенхимальный переход

Предпосылки

Колоректальный рак (CRC) имеет третье место по частоте злокачественных новообразований. % от общего числа случаев) и второе место по уровню смертности (9,2% от общего числа смертей от рака) в мире [1]. Сообщалось, что в 2018 году было 1,8 миллиона впервые диагностированных CRC, и 881000 человек умерли от CRC [1].CRC можно лечить с помощью хирургии, химиотерапии и специфической таргетной терапии. В настоящее время 5-летняя выживаемость местного распространенного CRC может достигать 69%; однако 5-летняя выживаемость метастатического CRC составляет всего около 12% [2]. Таргетная терапия включает опосредованную антителами терапию против EGFR и VEGF, а также низкомолекулярные соединения против протеинкиназ, такие как Регорафениб. Тем не менее, средняя выживаемость без прогрессирования (mPFS) метастатического CRC составляет всего 11 месяцев, даже при лечении таргетной терапией в сочетании с химиотерапией [3].Необходимо разработать новое лечение CRC.

Сушеный корень Actinidia chinensis Planch (ACP) (Teng-Li-Gen) — распространенное противораковое традиционное китайское лекарство для лечения CRC. Было подтверждено, что ACP ингибирует пролиферацию клеток CRC [4]. Мы продемонстрировали, что АСР индуцирует аноикис, сопровождаемый генерацией активных форм кислорода (АФК) и активацией каспазы-3 в клетках CRC RKO [5]. Аноикис — это тип апоптоза, который возникает в эпителиальных клетках после их отделения от внеклеточного матрикса (ЕСМ) и тесно связан с ростом клеточной суспензии и метастазированием опухоли [6].Урсоловая кислота (UA) является основным противораковым соединением, обнаруженным в ACP [7] (рис.). В настоящем исследовании мы дополнительно наблюдали эффекты UA на адгезию и рост суспензии CRC RKO клеток.

Химическая структура UA

Методы

Химические вещества и реагенты

Антитела UA, E-Cadherin (E-Cad) и N-Cadherin (N-Cad) были получены от Santa Cruz Biotechnology (Санта-Крус, Калифорния, США). ). Поли (2-гидроксипропилметакрилат) (поли-HEMA) был продуктом Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури, США).Трипсин-ЭДТА (0,25%), фетальная бычья сыворотка (FBS), пенициллин-стрептомицин (10000 Ед / мл) и культуральная среда DMEM были получены от Gibco (Гранд-Айленд, Нью-Йорк, США). 24-луночный набор для анализа Anoikis CytoSelect ™ был получен от Cell Biolabs (Сан-Диего, Калифорния, США). N-ацетил-L-цистеин (NAC), набор для окрашивания Hoechst 33258, набор для анализа протеина Bradford, наборы для анализа активности каспаз, набор для анализа ROS и Z-VAD-FMK были продуктами Beyotime (Хаймен, Цзянсу, Китай). Набор для подсчета клеток-8 (CCK-8) 8 был от Додзиндо (Шанхай, Китай).Набор клеточного цикла и набор для обнаружения апоптоза FITC Annexin V были произведены BD Pharmingen ™ (Сан-Диего, Калифорния, США). Антитела против AKT, p-AKT, B-клеточного CLL / лимфомы 2 (Bcl-2), Bcl2-ассоциированного белка X (Bax), киназы фокальной адгезии (FAK), фосфорилированного FAK (p-FAK), глицеральдегид-3-фосфата дегидрогеназа (GADPH), фосфатидилинозитол-3-киназа (PI3K) и p-PI3K были приобретены в компании Bioworld Technology (Сент-Луис Парк, Миннесота, США).

Клеточная культура

Клетки CRC RKO человека были из банка клеток коллекции типовых культур Китайской академии наук (кат.TCHu116), культивировали в среде DMEM (10% FBS и 1% стрептомицин-пенициллин) и поддерживали в инкубаторе с 5% CO 2 в среде с насыщенной влажностью при 37 ° C. Клетки RKO в фазе логарифмического роста использовали для последующих экспериментов.

Анализ жизнеспособности клеток

Всего 1 × 10 4 клеток RKO высевали в обычный или покрытый поли-HEMA 96-луночный планшет и культивировали в течение 24 часов, а затем обрабатывали разными дозами UA или тем же объемом диметилсульфоксид (ДМСО) в течение 48 часов.Затем в лунки добавляли 10 мкл реагента CCK-8 и инкубировали в течение 2 ч при 37 ° C. OD450 каждой лунки определяли с помощью считывающего устройства для микропланшетов. Выживаемость клеток рассчитывалась следующим образом: выживаемость (%) = [экспериментальное значение OD / контрольное значение OD] × 100%.

Анализ проточной цитометрии

Всего 2,5 × 10 5 клеток RKO высевали в 6-луночный планшет. После культивирования в течение 24 часов клетки обрабатывали разными дозами УК или одинаковым объемом ДМСО в течение 48 часов.Клетки собирали, фиксировали 75% этанолом, окрашивали йодидом пропидия (PI) и анализировали проточной цитометрией для идентификации клеточного цикла. Для обнаружения апоптоза RKO-клетки, обработанные UA, последовательно окрашивали FITC-аннексином V и PI, а затем определяли проточной цитометрией.

Окрашивание Hoechst 33258

Всего 2,5 × 10 5 клеток RKO высевали в 6-луночный планшет и культивировали в течение 24 ч, после чего добавляли различные концентрации UA или равный объем DMSO.Через 48 ч культивирования клетки фиксировали с последующим окрашиванием Hoechst33258. Затем морфологию клеток исследовали с помощью флуоресцентной микроскопии.

Обнаружение активности каспаз

Всего 2,5 × 10 5 клеток RKO высевали в 6-луночный планшет и культивировали в течение 24 часов, после чего клетки обрабатывали разными концентрациями УК или одинаковым объемом ДМСО для 48 ч, и собрали урожай. Активность каспаз определяли с помощью коммерческих наборов, в которых Ac-DEVD-pNA, Ac-IETD-pNA и Ac-LEHD-pNA использовались в качестве субстратов для каспаз-3, -8 и -9 соответственно.Чтобы выяснить роль каспаз в апоптозе, индуцированном UA, клетки RKO предварительно обрабатывали 100 мкМ Z-VAD-FMK (ингибитор каспаз) в течение 2 часов с последующей обработкой UA и обнаружением апоптоза.

Количественное определение ROS

ROS измеряли в соответствии с протоколом производителя. Вкратце, 2,5 × 10 5 клеток RKO высевали в 6-луночный планшет, культивировали в течение 24 часов и обрабатывали различными дозами UA или равным объемом ДМСО в течение 48 часов. Затем клетки окрашивали диацетатом 2 ‘, 7’-дихлорфлуоресцина (DCFH-DA) (разведенным в соотношении 1: 1000) в течение 20 минут, наблюдали с помощью флуоресцентной микроскопии и детектировали с помощью флуоресцентного ридера для планшетов (длина волны возбуждения 488 нм и длина волны излучения 525 нм).Для ингибирования ROS клетки RKO предварительно инкубировали с NAC (200 мкМ) в течение 2 часов с последующей обработкой UA и последующим обнаружением каспаз и апоптоза.

Обнаружение Anoikis

Всего 2,5 × 10 5 клеток RKO высевали в 24-луночный планшет, покрытый поли-HEMA, и культивировали в течение 24 часов. На следующий день клетки обрабатывали разными дозами УК или таким же объемом ДМСО в течение 48 часов и окрашивали 1 мкл EthD-1 в течение 1 часа при 37 ° C. Флуоресценцию наблюдали под микроскопом и измеряли с помощью считывающего устройства для флуоресцентных микропланшетов (настроенного на длину волны возбуждения 525 нм и длину волны излучения 590 нм).Для идентификации апоптоза клетки RKO, обработанные UA, которые выращивали в суспензии, последовательно окрашивали FITC-аннексином V и PI, а затем анализировали проточной цитометрией.

Вестерн-блоттинг

Экспрессию и фосфорилирование белка оценивали с помощью вестерн-блоттинга, как описано ранее [8, 9]. Вкратце, RKO-клетки, обработанные UA, собирали, лизировали и количественно определяли. Белки разделяли электрофорезом в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) (8-10%) и переносили на мембрану из поливинилиденфторида (PVDF) в полусухих условиях.После блокирования 5% обезжиренным молоком мембраны инкубировали с антителами против Bcl-2 и Bax (в разведении 1: 1000), AKT, p-AKT, FAK, p-FAK, PI3K и p-PI3K ( при разведении 1: 700), E-Cad и N-Cad (при разведении 1: 500) или GAPDH (при разведении 1: 2000) при 4 ° C в течение ночи и промывают PBST. Блоты зондировали вторичным антителом, конъюгированным с пероксидазой хрена (HRP) (1: 2000), в течение 1 ч, промывали PBST и проявляли реагентом с усиленной хемилюминесценцией (ECL).

Статистический анализ

Данные были выражены как среднее ± стандартное отклонение (SD).Различия между группами сравнивали с помощью одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA), и статистические различия учитывали при p < 0,05.

Результаты

UA подавляет жизнеспособность клеток

Мы впервые наблюдали влияние UA на жизнеспособность клеток RKO. Как показано на фиг. А, UA значительно подавлял жизнеспособность клеток RKO дозозависимым образом ( p < 0,05), значение полумаксимальной ингибирующей концентрации (IC50) UA составляло 18,54 мкМ.Рост клеток RKO полностью подавлялся 40 мкМ UA. Таким образом, для последующих исследований было выбрано 14–17 мкМ УК. Дальнейшее исследование показало, что 14-17 мкМ UA значительно подавляли жизнеспособность клеток RKO в зависимости от дозы и времени ( p < 0,01) (рис. B). Между тем плотность распределения клеток RKO снизилась после обработки UA (рис. C).

Влияние UA на рост клеток RKO. a и b , клетки RKO обрабатывали UA в зависимости от дозы и времени, а жизнеспособность клеток оценивали с помощью анализа CCK-8. c , клетки RKO обрабатывали UA (14–20 мкМ) в течение 48 часов и наблюдали под микроскопом (увеличение × 200). * p < 0,05, ** p < 0,01, по сравнению с контрольной группой

UA вызывает остановку клеточного цикла

Влияние UA на клеточный цикл анализировали с помощью мечения PI и проточной цитометрии. Результаты показаны на рис., Клетки RKO в фазе G0 / G1 увеличились ( p < 0,01), а клетки в фазе S уменьшились соответственно ( p < 0.01) после обработки 14–17 мкМ UA в течение 48 часов. Эти наблюдения показали, что UA может останавливать клеточный цикл RKO в фазе G0 / G1.

UA останавливает клеточный цикл. Клетки RKO обрабатывали UA (14–20 мкМ) в течение 48 ч, и распределение клеточного цикла анализировали с помощью проточной цитометрии ( a ), и результаты выражали как среднее значение ± стандартное отклонение ( b ). ** p < 0,01, по сравнению с контрольной группой

УК вызывает апоптоз

Апоптоз является важным механизмом натуральных продуктов для лечения рака [10].В нашем исследовании окрашивание Hoechst 33258 показало, что плотность распределения клеток RKO снизилась после обработки 14-17 мкМ UA в течение 48 часов. Более того, некоторые клетки были густо окрашены в ярко-синий цвет и демонстрировали фрагментацию ядра (рис. А), что свидетельствует о наличии апоптоза. Кроме того, двойное окрашивание FITC аннексином V / PI показало, что 14–17 мкМ UA способствует апоптозу клеток RKO ( p < 0,01) (рис. B и c).

UA вызывает апоптоз. Обработанные UA клетки RKO подвергали окрашиванию Hoechst 33258 ( a ), анализу проточной цитометрии для обнаружения апоптоза ( b ) и выражали как среднее значение ± стандартное отклонение ( c ). ** p < 0,01, по сравнению с контрольной группой

UA активирует каспазы

Апоптоз — это каспазно-опосредованная гибель клеток, которая тесно коррелирует с активацией каспаз [10, 11]. Результаты нашего исследования показали, что 14-17 мкМ УК значительно активировали каспазу-3, -8 и -9 в клетках RKO ( p < 0,05) (рис. A-c). Кроме того, ингибитор каспаз Z-VAD-FMK значительно противодействовал индуцированному УК апоптозу ( p < 0,01) (рис.г). Эти результаты позволяют предположить, что каспазы участвуют в индуцированном UA апоптоза клеток RKO. Более того, UA подавлял экспрессию Bcl-2 и повышал экспрессию Bax ( p < 0,05) (рис. E и f, дополнительный рис. 1).

UA активирует каспазы. Активность каспазы-3 ( a ), — 8 ( b ) и — 9 ( c ) в клетках RKO, обработанных UA. d . После предварительной инкубации с Z-VAD-FMK в течение 2 часов клетки RKO обрабатывали UA и подвергали детекции апоптоза.Экспрессию Bcl-2 и Bax в клетках RKO, обработанных UA, оценивали с помощью вестерн-блоттинга ( e ) и анализировали с помощью программного обеспечения Quantity One ( f ). * p < 0,05, ** p < 0,01, по сравнению с контрольной группой; # p < 0,05, ## p < 0,01, по сравнению с группой UA

UA увеличивает ROS

Высокий уровень ROS вызывает апоптоз клеток [12]. В этом исследовании окрашивание DCFH-DA показало, что 14-17 мкМ UA значительно увеличивают уровни ROS в клетках RKO ( p < 0.01) (рис. А и б). Между тем, NAC, поглотитель ROS, может противодействовать UA увеличенной активности каспазы-3, -8 и -9 и способствовать апоптозу ( p < 0,01) (рис. C-f). Эти результаты продемонстрировали, что АФК участвуют в активации каспаз и индукции апоптоза, вызываемого УК.

UA увеличивает ROS. Клетки RKO обрабатывали UA, окрашивали DCFH-DA, наблюдали под микроскопом (× 200) ( a ), и флуоресценцию детектировали планшет-ридером ( b ).После предварительной инкубации с NAC в течение 2 ч клетки RKO обрабатывали UA и подвергали детекции активности каспазы-3 ( c ), -8 ( d ) и -9 ( e ) и апоптоза ( ф ). ** p < 0,01 по сравнению с контрольной группой; # p < 0,05, ## p < 0,01, по сравнению с группой UA

UA индуцирует аноикис

Мы наблюдали, что ACP индуцирует аноикис в клетках RKO [5]. UA, основной компонент Teng-Li-Gen, может иметь аналогичные эффекты на клетки RKO.В настоящем исследовании поли-НЕМА использовался для уменьшения клеточной адгезии. Как показано на фиг. А, UA подавлял рост клеток RKO в отделенном состоянии, значение IC50 UA составляло 31,81 мкМ. Рост суспендированных клеток RKO полностью подавлялся 46 мкМ UA ( p < 0,01). Кроме того, анализ аноикиса показал, что клетки RKO, выращенные в суспензии, могут поглощать EthD-1 и излучать красную флуоресценцию после обработки UA ( p < 0,01) (рис. B и c), что указывает на возникновение аноикиса. Более того, двойное окрашивание FITC Annexin V / PI показало, что UA способствует апоптозу в суспензионных клетках RKO ( p < 0.01), которые мы считаем аноикис (рис. D).

UA вызывает аноикис. Клетки RKO, выращенные в планшетах, покрытых ploy-HEMA, обрабатывали UA в течение 48 часов и подвергали анализу жизнеспособности клеток ( a ), окрашиванию EthD-1 (× 200) ( b ) и красной флуоресценции, обнаруживаемой планшет-ридером. ( c ), окрашивали FITC Аннексином V и PI и анализировали проточной цитометрией ( d ). ** p < 0,01, по сравнению с контрольной группой

UA ингибирует передачу сигналов FAK

FAK является важным белком, регулирующим аноикис, и его передача сигналов ниже по течению тесно связана с путем PI3K / AKT [13].В настоящем исследовании экспрессия и фосфорилирование этих белков были идентифицированы с помощью вестерн-блоттинга. Результаты показали, что UA не оказывал значительного влияния на экспрессию FAK, PI3K или AKT в клетках RKO, выращенных в суспензии. Однако UA ингибировал уровни фосфорилирования этих белков в клетках RKO, выращенных в суспензии, дозозависимым образом (рис. A-f, дополнительный рис. 2A-I).

UA регулирует аноикис-связанные белки. Экспрессию и фосфорилирование белков в клетках RKO, обработанных UA, оценивали с помощью вестерн-блоттинга с указанными антителами ( a , c , e и g ) и анализировали с помощью программного обеспечения Quantity One ( b , d ). , f и h ). * p < 0,05, ** p < 0,01, по сравнению с контрольной группой

UA ингибирует эпителиально-мезенхимальный переход (EMT)

Устойчивость к анойкису тесно связана с EMT [13, 14]. UA продемонстрировал ингибирующее действие на EMT в вирусных раковых клетках, включая клетки CRC [15-17]. В настоящем исследовании экспрессию маркерных белков ЕМТ определяли с помощью вестерн-блоттинга. Результаты показали, что UA ингибирует экспрессию N-Cad (мезенхимальный маркер) и повышает экспрессию E-Cad (эпителиальный маркер) (рис.g и h, дополнительный рис. 2 J-L), предполагая, что UA ингибирует EMT в клетках RKO.

Обсуждение

Раковые клетки пролиферируют неконтролируемым образом, по этой причине подавление пролиферации клеток является основным принципом терапии рака [18]. Результаты этого текущего исследования показали, что UA значительно ингибирует рост клеток RKO. Между тем, анализ клеточного цикла показал, что количество клеток RKO на стадии G0 / GI увеличивалось, а количество клеток в фазе S уменьшалось после обработки UA. Поскольку пролиферация клеток является самовоспроизводящимся процессом, по крайней мере частично, на основе кинетики клеточного цикла, это предполагает, что остановка клеточного цикла участвовала в блокировании роста клеток RKO обработкой UA.Кроме того, окрашивание Hoechst 33258 и аннексином V / PI показало, что UA также способствует апоптозу клеток RKO.

Апоптоз регулируется каскадом белковых реакций, которые являются важным механизмом лечения рака [19]. Апоптотические клетки демонстрируют характерную и специфическую морфологию, включая апоптотические тельца и фрагментацию ДНК. Апоптотический процесс в основном связан с митохондриальными / внутренними путями и рецепторами смерти / внешними путями и регулируется множеством белков, таких как Bcl-2 и Bax.В митохондриальном пути цитотоксические сигналы снижают потенциал митохондриальной мембраны (ММП) и вызывают высвобождение цитохрома С, таким образом активируя каспазы-9 и -3, чтобы инициировать апоптоз. В пути рецептора смерти лиганды смерти, такие как FasL, TNF и TRAIL, связываются со своими соответствующими рецепторами и последовательно активируют каспазы-8 и -3, чтобы спровоцировать апоптоз. Настоящее исследование показало, что UA активировал каспазы-8, -9 и -3. Между тем, Z-VAD-FMK антагонизировал UA, индуцированный апоптозом, что позволяет предположить, что каспазы участвуют в индуцированном UA апоптозе.

Апоптоз связан с множеством факторов, включая продукцию АФК [12, 20]. АФК представляют собой внутриклеточно активные формы кислорода, в том числе. OH, O 2 и H 2 O 2 . Высокий уровень АФК вызывает апоптоз за счет активации каспазы-8 или каспазы-9 через митохондриальные пути или пути рецептора смерти. DCFH-DA может свободно проникать через клеточную мембрану, которая может гидролизоваться с образованием DCFH под действием эстеразы, генерируя 2 ‘, 7’-дихлорфлуоресцеин (DCF) с интенсивностью флуоресценции, которая связана с эффектами ROS.Интенсивность флуоресценции DCF отражает относительные уровни внутриклеточных АФК. Окрашивание DCFH-DA показало, что клетки RKO испускали зеленое цветение после обработки UA, указывая на то, что UA увеличивал уровни ROS. Дальнейшие исследования показали, что антагонист NAC UA активирует каспазу-3, -8 и -9 и способствует апоптозу. Эти наблюдения предполагают, что ROS участвуют в индуцирующих апоптоз эффектах UA в клетках RKO.

Мы также наблюдали эффекты UA на рост суспензии RKO-клеток с использованием поли-HEMA для снижения адгезии клеток.Результаты показали, что UA подавлял рост суспензии и стимулировал аноики в клетках RKO. Аноикис — это тип апоптоза, возникающий в эпителиальных клетках из-за отделения от ECM, включая эпителиальные раковые клетки, и, таким образом, известен как апоптоз, вызванный отслоением [21]. FAK — важный белок, регулирующий аноикис [13]. Активация FAK обеспечивает сигналы выживания для предотвращения аноикиса и делает это через сигнальный путь PI3K / AKT. Ингибирование FAK может стимулировать аноикис [22]. Результаты настоящего исследования продемонстрировали, что UA ингибирует фосфорилирование FAK, PI3K и AKT в клетках RKO, выращенных в суспензии, предполагая, что индуцированные UA аноики могут быть связаны с этими белками.

EMT связано с устойчивостью к аноикису [13, 14]. EMT — это процесс, при котором эпителиальные клетки, в том числе эпителиальные раковые клетки, теряют эпителиальные характеристики и приобретают мезенхимальный фенотип, сопровождаемый снижением экспрессии эпителиального маркера E-Cad и увеличением экспрессии мезенхимального маркера N-Cad. Передача сигнала PI3K / AKT способствует ЭМП [23, 24]. Настоящее исследование показало, что UA может увеличивать экспрессию E-Cad, снижать экспрессию N-Cad и сопровождаться подавлением синглинга PI3K / AKT, предполагая, что UA может ингибировать EMT и может быть связан с синглингом PI3K / AKT.

Выводы

Таким образом, настоящее исследование предполагает, что UA подавляет жизнеспособность клеток, индуцирует остановку клеточного цикла в фазе G0 / G1 и регулирует экспрессию Bcl-2 / Bax, увеличивает ROS, что приводит к активации каспазы-3, — 8 и — 9, а также индуцирует апоптоз в клетках RKO. UA также подавляет рост суспензии RKO-клеток, вызывает аноикис и может быть связан с выделением FAK / PI3K / AKT и ингибированием EMT. Это исследование обеспечило фундаментальную основу для применения UA для лечения колоректального рака.

Дополнительная информация

Дополнительный файл 1: Дополнительный рисунок 1 . UA регулирует экспрессию Bcl-2 и Bax. Обработанные UA клетки RKO подвергали вестерн-блоттингу с антителами против Bcl-2 (A), Bax (B) и GAPDH (C). Дополнительный рисунок 2 . UA регулирует экспрессию белков, связанных с анокисом. Обработанные UA клетки RKO подвергали вестерн-блоттингу с антителами против p-FAK (A), FAK (B), p-PI3K (D), PI3K (E), p-AKT (G), AKT (H), N- Cad (J), E-Cad (K) и GAPDH (C, F, I и L). (31M, docx)

Сокращения

Половинная ингибирующая

N-ацетил-L-цистеин

метакрилат)

CCK-8 Набор для подсчета клеток-8
CRC Колоректальный рак
DCFH-DA 2 ‘, 7′-sc Dichloroflutate
ДМСО Диметилсульфоксид
FAK Киназа фокальной адгезии
GAPDH Глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа
IC50
OD Оптическая плотность
PI Иодид пропидия
PI3K Фосфатидилинозитол 3-киназа
poly-HEMA
ROS Активные формы кислорода
SD Стандартное отклонение
UA Урсоловая кислота

Вклад авторов

BH разработал исследование и отредактировал рукопись; BH и HMA координировали техническую поддержку и финансирование; JLZ выполнила исследование и подготовила рукопись; SSW, KPS, LC, XP и JFC приняли участие в исследовании.Все авторы прочитали и одобрили окончательную рукопись.

Финансирование

Это исследование было поддержано Национальным фондом естественных наук Китая (номер гранта 82074352), Фондом естественных наук муниципалитета Шанхая (номер гранта 20ZR1458700), Фондом естественных наук больницы Лунхуа (номер гранта 2018YM03) и Программой науки Комиссия по технологиям муниципалитета Шанхая (номер гранта 19401933400). Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Доступность данных и материалов

Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по разумному запросу.

Этическое одобрение и согласие на участие

Не применимо.

Согласие на публикацию

Не применимо.

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

Примечания

Примечания издателя

Springer Nature сохраняет нейтралитет в отношении юрисдикционных претензий на опубликованных картах и ​​принадлежностей организаций.

Список литературы

1. Брей Ф., Ферли Дж., Сурджоматарам И., Сигель Р.Л., Торре Л.А., Джемаль А. Глобальная статистика рака 2018: оценки GLOBOCAN заболеваемости и смертности от 36 раковых заболеваний в 185 странах во всем мире. CA Cancer J Clin. 2018; 68 (6): 394–424. DOI: 10.3322 / caac.21492. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3. Огата Т., Сатаке Х., Огата М., Хатачи Й., Маруока Х., Ямасита Д. и др. Безопасность и эффективность FOLFOXIRI плюс молекулярная таргетная лекарственная терапия для метастатического колоректального рака: многоцентровое ретроспективное исследование.Oncotarget. 2019; 10 (10): 1070–1084. DOI: 10.18632 / oncotarget.26626. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 4. Цзо Л.Л., Ван З.Й., Фань З.Л., Тиан С.К., Лю-младший. Оценка антиоксидантных и антипролиферативных свойств экстрактов трех актинидий ( Actinidia kolomikta , Actinidia arguta , Actinidia chinensis ) in vitro. Int J Mol Sci. 2012. 13 (5): 5506–5518. DOI: 10.3390 / ijms13055506. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 5. Ху Б, Шен КП, Ши XF, Дэн С, Вэй ММ.Корень Actinidia chinensis planch индуцирует аноикис в клетках RKO карциномы толстой кишки. Chin J Exp Trad med form. 2013. 19 (16): 242–245. [Google Scholar] 6. Джин К., Ли Т., Ван Дам Х, Чжоу Ф., Чжан Л. Молекулярное понимание метастазов опухоли: отслеживание доминирующих событий. J Pathol. 2017; 241 (5): 567–577. DOI: 10.1002 / путь.4871. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 7. Zhu WJ, Yu DH, Zhao M, Lin MG, Lu Q, Wang QW и др. Антиангиогенные тритерпены, выделенные из китайской фитотерапии. Actinidia chinensis planch.Противораковые агенты Med Chem. 2013. 13 (2): 195–198. DOI: 10,2174 / 1871520611313020002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8. Дэн С., Ху Б., Ань Х.М., Ду Цюй, Сюй Л., Шен К.П. и др. Teng-long-Bu-Zhong-tang, китайская травяная формула, усиливает противораковые эффекты 5-фторурацила при карциноме толстой кишки CT26. BMC Complement Altern Med. 2013; 13: 128. DOI: 10.1186 / 1472-6882-13-128. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9. Ху Б., Ань Х.М., Ван СС, Чжэн Дж.Л., Ян X, Хуанг XW и др. Teng-long-Bu-Zhong-tang индуцирует p21-зависимое клеточное старение в клетках колоректальной карциномы LS174T посредством ацетилирования гистонов.J Exp Pharmacol. 2017; 9: 67–72. DOI: 10.2147 / JEP.S129272. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 10. Ван И, Чжун Дж, Бай Дж, Тонг Р., Ань Ф, Цзяо П. и др. Применение натуральных продуктов в терапии рака путем нацеливания на пути апоптоза. Curr Drug Metab. 2018; 19 (9): 739–749. DOI: 10,2174 / 1389200219666180511154722. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Фульда С. Модуляция апоптоза натуральными продуктами для лечения рака. Planta Med. 2010. 76 (11): 1075–1079. DOI: 10.1055 / с-0030-1249961.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Редза-Дютордуар М, Аверилл-Бейтс Д.А. Активация сигнальных путей апоптоза активными формами кислорода. Biochim Biophys Acta. 2016; 1863 (12): 2977–2992. DOI: 10.1016 / j.bbamcr.2016.09.012. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13. Паоли П., Джаннони Э., Кьяруги П. Молекулярные пути Аноикиса и его роль в прогрессировании рака. Biochim Biophys Acta. 2013; 1833 (12): 3481–3498. DOI: 10.1016 / j.bbamcr.2013.06.026. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Цао З., Ливас Т., Киприану Н.Аноикис и ЕМТ: смертельные «связи» во время прогрессирования рака. Crit Rev Oncog. 2016. 21 (3–4): 155–168. DOI: 10.1615 / CritRevOncog.2016016955. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Li J, Dai C, Shen L. Урсоловая кислота ингибирует эпителиально-мезенхимальный переход через путь Axl / NF-κB в клетках рака желудка. Evid Based Complement Alternat Med. 2019; 2019: 2474805. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 16. Ван X, Ван Т., Йи Ф, Дуань Ц., Ван Ц., Хэ Н и др. Урсоловая кислота подавляет рост опухоли через эпителиально-мезенхимальный переход в клетках колоректального рака.Биол Фарм Булл. 2019; 42 (5): 685–691. DOI: 10.1248 / bpb.b18-00613. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Сюй К.Г., Чжу XL, Ван В., Чжоу XJ. Урсоловая кислота ингибирует эпителиально-мезенхимальный переход in vitro и in vivo. Pharm Biol. 2019; 57 (1): 169–175. DOI: 10.1080 / 13880209.2019.1577464. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18. Ханахан Д., Вайнберг Р.А. Признаки рака: следующее поколение. Клетка. 2011. 144 (5): 646–674. DOI: 10.1016 / j.cell.2011.02.013. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 19.Голдар С., Ханиани М.С., Дерахшан С.М., Барадаран Б. Молекулярные механизмы апоптоза и роль в развитии и лечении рака. Азиатский Pac J Cancer Prev. 2015; 16 (6): 2129–2144. DOI: 10.7314 / APJCP.2015.16.6.2129. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 20. Матес Дж. М., Санчес-Хименес FM. Роль активных форм кислорода в апоптозе: значение для терапии рака. Int J Biochem Cell Biol. 2000. 32 (2): 157–170. DOI: 10.1016 / S1357-2725 (99) 00088-6. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Гроссманн Дж. Молекулярные механизмы апоптоза, вызванного отслойкой — Аноикис.2002. 7 (3): 247–260. DOI: 10,1023 / А: 1015312119693. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 22. Даксбери М.С., Ито Х., Зиннер М.Дж., Эшли С.В., Ван Э. Подавление гена киназы очаговой адгезии способствует аноикису и подавляет метастазирование клеток аденокарциномы поджелудочной железы человека. Хирургия. 2004. 135 (5): 555–562. DOI: 10.1016 / j.surg.2003.10.017. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 23. Kent CN, Guttilla Reed IK. Регуляция эпителиально-мезенхимального перехода при раке эндометрия: соединение PI3K, передача сигналов эстрогена и микроРНК.Clin Transl Oncol. 2016; 18 (11): 1056–1061. DOI: 10.1007 / s12094-016-1492-2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24. Фанг Д., Китамура Х. Раковые стволовые клетки и эпителиально-мезенхимальный переход при уротелиальной карциноме: возможные пути и потенциальные терапевтические подходы. Int J Urol. 2018; 25 (1): 7–17. DOI: 10.1111 / iju.13404. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar].

Leave a Comment

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *