Мармок youtube: «Пусть ты испортил здоровье — зато видео вовремя вышло»: YouTube-блогер с 11,8 млн подписчиков рассказал о выгорании

Содержание

«Пусть ты испортил здоровье — зато видео вовремя вышло»: YouTube-блогер с 11,8 млн подписчиков рассказал о выгорании

30 Января, 2020,
12:01

5544

Марин Мокану из Кишинева известен в YouTube под ником Mr. Marmok. Он с 2014 года снимает игровые видео: обзоры, прохождения, подборки. Общее количество подписчиков его канала превышает 11,8 млн пользователей, а ролики обычно набирают от 3 до 7 млн просмотров.

Как и многие YouTube-звезды, он со временем превратил увлечение в полноценную работу. Как и для многих YouTube-блогеров, сейчас канал для Marmok — основной источник дохода благодаря рекламе. Его клиенты отмечают эффективность его работы: по словам основателя Livepage Михаила Щербачова, который сотрудничал с Marmok в 2017 году по игровому проекту, размещение дало всплеск аудитории, хорошие отклики и улучшенные позиции сайта.

Но по словам самого блогера, эта успешная деятельность дается ему нелегко. 28 января 2020 года он записал обращение к подписчикам, в котором откровенно рассказал о проблемах со здоровьем и общей усталости из-за работы YouTube-блогером. И объяснил, почему перейдет на плавающий график публикации видео на канале. До этого объявления он готовил и публиковал видео каждую неделю.

Приводим основные тезисы его обращения:

  • YouTube поменял мою жизнь. YouTube — это моя еда в холодильнике, это — мой офис, игрушки и одежда моего сына. Это — основной источник моего дохода. Из года в год я каждую пятницу заливаю видео на канал. Это — удобный график, задающий каналу стабильный пульс, его обязательный темп. И он же загнал меня в очень неуютные рамки.
  • Видео для YouTube — это работа, требующая творческого подхода и креативного мышления. Но нельзя по графику родить смешную шутку, включить позитивный настрой. Бывают дни, когда вообще не хочется ни с кем общаться, настроение — черно-белое, но все равно надо с кошачьим говном на душе садиться за видео и входить в образ.
  • Мое стремление выпускать видео вовремя, ложиться под утро, чтобы успеть все смонтировать, привело к проблемам со здоровьем. Я думал, что это укрепляет дух и учит ответственности, но мое тело отчетливо дало мне понять, что я — долб**б. Сейчас у меня проблемы со спиной, коленями, сердцем, зрением и шеей. Из-за последней я даже перестал ходить в зал. Пусть твоя моча и сегодня пахнет таблетками, зато видео вовремя вышло и превьюшка красивая. Это — «правильно расставленные приоритеты».
  • Давайте представим, что такое жизнь ютубера. Ее начало — это начало работы на площадке, а смерть — либо совершенная глупость с необратимыми последствиями, либо творческая импотенция, когда человек начинает со свинцовой улыбкой снимать пресные безвкусные видео. Когда человек делает контент, потому что так надо — это всегда бросается в глаза.
  • Меня в периоды сильной усталости тоже стимулировали деньги. Но я достиг той точки за***банности, когда деньги больше не являются импульсом. Я сильно устал. Без новых идей нет желания работать.
  • Если оставить все как есть, мой следующий этап ютуберской жизни — «смерть». Снимать мертвые бесцветные видео просто потому, что надо что-то кушать и содержать семью. Так дальше не может продолжаться, поэтому я перехожу с фиксированного на плавающий график. Буду заниматься роликами столько, сколько нужно, не тратя свою шкалу здоровья. И видео заливать буду тогда, когда получится.

Читайте также:

Marmok Статистика видео

видео опубликованный просмотров видео Комментарии Нравится Не нравится Расчетный доход
Half-Life 2 (Все эпизоды) «Баги, Приколы, Фейлы» 16. 12.2016 5,368,651 11,709 154,301 3,107 $ 2.01K — $ 12.1K
Far Cry 2 «Баги, Приколы, Фейлы» 23.12.2016 3,922,077 9,746 181,446 2,379 $ 1.47K — $ 8.82K
Лучшее за 2016 год «Баги, Приколы, Фейлы» 30.12.2016 6,950,044 15,272 164,419 3,242 $ 2.61K — $ 15.6K
#14 CS:GO — Сложная загадка 13.01.2017 8,942,845 39,148 257,027 4,670 $ 3.35K — $ 20.1K
Assassin’s Creed 3 «Баги, Приколы, Фейлы» 20.01.2017 3,151,582 10,155 159,189 2,085 $ 1. 18K — $ 7.09K
Resident Evil 7 — Сложные отношения 27.01.2017 5,837,806 10,026 190,955 3,160 $ 2.19K — $ 13.1K
«Баги, Приколы, Фейлы» Лучшее за январь 2017 29.01.2017 2,158,869 4,584 90,554 1,653 $ 809 — $ 4.86K
Crysis 2 «Баги, Приколы, Фейлы» 03.02.2017 4,244,073 12,314 167,313 2,596 $ 1.59K — $ 9.55K
#15 CS:GO — Я просто бросил гранату [#FIXCSGO] 10.02.2017 11,652,371 24,619 351,654 7,823 $ 4.37K — $ 26.2K
Sniper Elite 4 «Баги, Приколы, Фейлы» 17. 02.2017 3,309,931 11,006 194,307 1,931 $ 1.24K — $ 7.45K
«Баги, Приколы, Фейлы» Лучшее за февраль 2017 27.02.2017 3,786,454 4,726 112,315 1,732 $ 1.42K — $ 8.52K
Wolfenstein: The New Order «Баги, Приколы, Фейлы» 24.02.2017 6,760,339 10,667 188,131 3,087 $ 2.54K — $ 15.2K
Rainbow Six: Siege — Очень быстрый раунд 03.03.2017 7,669,784 12,275 213,895 5,567 $ 2.88K — $ 17.3K
Хорошие игры #1 «Баги, Приколы, Фейлы» 10.03.2017 3,217,630 12,332 161,335 2,189 $ 1. 21K — $ 7.24K
Ghost Recon: Wildlands «Баги, Приколы, Фейлы» 17.03.2017 3,851,933 10,862 152,424 2,638 $ 1.44K — $ 8.67K
#1 The Forest «Баги, Приколы, Фейлы» 24.03.2017 6,807,075 13,855 214,211 3,121 $ 2.55K — $ 15.3K
Mass Effect: Andromeda «Баги, Приколы, Фейлы» 31.03.2017 3,852,113 11,134 170,122 3,328 $ 1.44K — $ 8.67K
«Баги, Приколы, Фейлы» Лучшее за март 2017 02.04.2017 2,476,402 5,341 93,149 1,565 $ 928 — $ 5.57K
Rise of the Tomb Raider «Баги, Приколы, Фейлы» 07. 04.2017 3,549,796 10,385 154,538 2,094 $ 1.33K — $ 7.99K
#16 CS:GO — Почти эйсы 14.04.2017 5,581,039 13,060 188,489 3,276 $ 2.09K — $ 12.6K
#2 The Forest «Баги, Приколы, Фейлы» 21.04.2017 5,670,074 9,495 177,233 2,787 $ 2.13K — $ 12.8K
Outlast 2 — Звонок 28.04.2017 7,865,966 16,582 225,675 4,184 $ 2.95K — $ 17.7K
«Баги, Приколы, Фейлы» Лучшее за апрель 2017 30.04.2017 2,606,026 4,035 85,697 1,512 $ 977 — $ 5. 86K
Fallout 3 «Баги, Приколы, Фейлы» 05.05.2017 4,854,941 12,306 169,616 4,362 $ 1.82K — $ 10.9K
Prey (2017) «Баги, Приколы, Фейлы» 12.05.2017 5,304,976 11,203 166,306 2,910 $ 1.99K — $ 11.9K

Статистика YouTube канала Mr. Marmok

Mr. Marmok

Дата создания: 2008-04-27
Количество подписчиков: 16 400 000 (10-й)
Количество просмотров: 2 807 009 982 (65-й)
Количество видео для просмотра: 321

О чем канал: Хэй пиплы!
Я Мармок. Здесь я пытаюсь поднять людям настроение смешными нарезками по различным играм, и не только! 😀


Статистика просмотров, подписчиков и заработка на ютубе за последние 14 дней

Дата Подписчики Разница Просмотров Разница Роликов Разница ~Доход
2021-08-31 16 400 000 . .. 2 807 009 982 +1 541 191 321 $493 — 1.8k
2021-08-30 16 400 000 +100 000 2 805 468 791 +630 879 321 $201 — 757
2021-08-29 16 300 000 2 804 837 912 +899 595 321 $287 — 1k
2021-08-28 16 300 000 2 803 938 317 +979 139 321 $313 — 1.1k
2021-08-27 16 300 000 2 802 959 178 +972 028 321 $311 — 1.1k
2021-08-26 16 300 000 2 801 987 150 +1 269 241 321 $406 — 1.5k
2021-08-25 16 300 000 2 800 717 909 +861 754 321 $275 — 1k
2021-08-24 16 300 000 2 799 856 155 +1 141 137 321 . .. $365 — 1.3k
2021-08-23 16 300 000 2 798 715 018 +1 111 338 321 $355 — 1.3k
2021-08-22 16 300 000 2 797 603 680 +1 173 953 321 $375 — 1.4k
2021-08-21 16 300 000 2 796 429 727 +1 869 776 321 $598 — 2.2k
2021-08-20 16 300 000 2 794 559 951 +2 681 592 321 +2 $858 — 3.2k
2021-08-19 16 300 000 2 791 878 359 +1 095 731 319 $350 — 1.3k
2021-08-18 16 300 000 2 790 782 628 319 $0 — 0

Адвокат по недобросовестным действиям | Судебный процесс Marpractice

Если вы ищете адвоката или поверенного для рассмотрения дела о халатности или судебного иска, позвоните нам прямо сейчас. Мы поможем вам получить достойное поселение!

Случаи злоупотребления служебным положением могут привести к серьезным травмам и ответственности сторон. При рассмотрении случая злоупотребления служебным положением может потребоваться привлечь юриста или поверенного. Может потребоваться подать иск против лица, вызвавшего происшествие или травмы.Если у вас есть проблема злоупотребления служебным положением, у вас может быть судебное дело или судебный иск, который может привести к урегулированию денежного ущерба. Закон на вашей стороне, но есть ограничения по времени, определяющие, как долго вы должны подавать иск, и другие ограничения. Вам необходимо проконсультироваться с юристом или поверенным, чтобы они могли решить по существу вашего судебного дела.

Знаете ли вы, что медицинская халатность является третьей по значимости причиной смерти в Соединенных Штатах после болезней сердца и рака? Одна неосторожная ошибка врача или больницы может изменить всю вашу жизнь.

Тысячи людей получают травмы каждый год, и многие из них никогда не предъявляют иски о злоупотреблении служебным положением. Если вы или ваш близкий получили травму из-за халатности врача или больницы, вы можете иметь право на существенную компенсацию.

Вы должны знать о своих юридических возможностях. Получение компенсации — ваше право. Не будь жертвой. Получите помощь, которую вы заслуживаете.

Специалисты по приему в Helios Legal Group ответят на любые ваши вопросы.

Позвоните на нашу горячую линию по борьбе с враждебностью, чтобы получить бесплатную консультацию прямо сейчас!

Злоупотребление служебным положением — слишком частое явление в Соединенных Штатах.Из-за злоупотреблений служебным положением погибает больше людей, чем из-за насилия с применением огнестрельного оружия или вождения наркотиков, но это очень мало освещается в прессе. Только рак и болезни сердца уносят больше жизней, чем халатность со стороны поставщика медицинских услуг, но, опять же, нет громких некоммерческих организаций, выступающих в защиту людей, которые страдают от них. Семьям предоставляется помощь страховым компаниям, и зачастую помощь оказывается намного меньше, чем им необходимо для покрытия различных расходов, связанных с травмой их близких. Ежегодно тысячи людей получают травмы, не подавая иск о халатности.Урегулирования в связи с халатностью производятся страховыми компаниями без участия пострадавших. Предполагается, что страховая компания решит проблему в меру своих возможностей и не будет обращаться за помощью к адвокату по борьбе с халатностью. Очень немногие понимают, что их страховые компании не стремятся максимизировать выплаты, они стремятся закрыть дело с минимальными усилиями с их стороны. С другой стороны, юристы, занимающиеся противозаконными действиями, преследуют противоположную цель. Им платят только тогда, когда они выигрывают, и чем больше они получают для своих клиентов, тем больше они получают.Таким образом, работа каждого адвоката по травмам заключается в максимальном возмещении ущерба или компенсации для своих клиентов.

Если вы или кто-либо из членов вашей семьи пострадали или пострадали из-за халатности или ненадлежащего обращения со стороны врача или больницы, вам доступны несколько юридических вариантов. Адвокаты Helios Law Group готовы предоставить бесплатные консультации по вашим искам о злоупотреблениях, чтобы вы могли принять лучшее решение для себя и своей семьи в это очень тяжелое время в вашей жизни.Закон предусматривает справедливую компенсацию, если кто-то был ранен из-за некомпетентности и халатности других.

Наши специалисты по приему в юридической группе Helios готовы ответить на ваши вопросы относительно закона о врачебной халатности или направить вас к одному из наших юристов за юридической консультацией. Мы предлагаем бесплатные консультации по телефону или через функцию Click to Chat.

Позвоните нам сегодня по нашей бесплатной горячей линии или выберите функцию Click to Chat. Юридическая группа Helios здесь для вас!

Еженедельный журнал Five Mile Beach.(Уайлдвуд, штат Нью-Джерси) 1906-1923, 30 июля 1909, стр. 7, изображение 7 «Летопись Америки» Библиотека Конгресса

Текст страницы газеты

                 

Т_. t .. t .. TT Tr TI Cement Cemenl, Pacific Interest
ЛОТ ИМЯ блока Til, Til, Til, J & JlL TIT, Walk Curb Avenue и ИТОГО
1902 1903 1909 1905 1906 Assess '# Assess'f f Assess • »CoefJ
5 56 4 10 4 20 19 25 5 87 38 75
5 56 4 10 19 5 2 5 00 84 18
5 56 4 10 4 20 19 52 5 37 38 75
4, 5 142 Holly Beach Improvement Co.39 04 4 12 43 16
6 142 Ely 4 Hess 19 52 2 56 22 08
1®! 2ll 22 142 Miller, FA 136 64 10 93 147 57
23, '2t] 25 142 Frank, William B. 25 15 58 56 7 94 91 85
28 142 Haswtn, Frances R., Estate 19 52 2 56 22 08
30 142 Wlldwoed. Anqltsu 4 Halle Beack 61! CO.- 19 52 2 56 22 08
6, 7 143 Smith, Mrs. LI. С. 18 00 19 52 6 46 44 58
9 148 Бахман, Хедлг 19 52 2 56 22 08
10 148 Моррисон, Уильям младший 19 52 2 56 22 08
лет 14, лет 15 143 А1 большой, Чарльз 44 00-18 50 19 52 70 45 27 83 179 80
16 143 Джонсон, Нелли 19 95 19 52 4 35 43 82
17, 18 148 Килмер, Элмер 24 10 39 04 6 28 69 42
21 143 9 30 19 52 4 51 33 33
■ 22 143 9 30 19 52 4 51 S3 33
23 143 Гольдштейн, И. onis 19 52 2 56 22 08
24 143 Bachman, Hedwlg 19 52 2 56 22 08
9 22 12 60 19 52 5 07 46 41
27 143 Bright, Oliver 19 52 2 56 22 08
'A 28,% 29, V, 30 143 Мэтьюз, Рут Дж. 89 26 28 28 70 45 20 44 208 43
1144 Брайт, Оливер 140 90 19 82 160 22
19 52 2 56 22 08
78 08 7 25 80 33
6 147 Холл, Mark 8 15 1 28 4 43
115 1 28 4 43
15 1 28 4 43
1 до * 15 Включительно 147 Baker, LR 42 00 4 36 46 36
1–10 включительно 148 Baker, LR 50 00 5 00 55 00
25; 29 88 80 89 04 11 40 114 58
8 149 Слорнан, Генри, Эстейт 19 52 2 08 22 08
89 01 4 12 43 1H
19 52 2 58 22 OS
7, 20 149 Миллер, д-р.GJR 8 86 13 12 39 04 11 90 72 92
8 149 Харнетт, Клара 19 52 2 58 22 08
0, 10,22 149 Рив, Джон 15 75 58 58 7 10 81 41
I, 12, 13, 14, 23,24 149 Саут Джерси Транспортейшн Ко. 24 15124 60117 12 19 13 185 00
15 149 Тернер, Кассл 14 85 14 72 3 34 32 91
16 149 Гаррат, Бениамин 19 52 2 58 22 08
17 149 Хилтон, Вашингтон i 19 52 2 58 22 08
19 149 Грин, G. I). 19 52 2 58 22 08
21 149 Конрад, Джейкоб 5 83 5 25 19 52 4 88 35 28
25 149 лей, Джеймс 19 52.2 56 22 08
28,% 29 149 Брэдфорд, Чарльз К. и Фрэнсис Э. 29 28 2 34 81 62
г, 29, SO 149 Coombs Lumber Co. 29 28 2 84 31 62
2150 Эймс, Асент Х. 86 85 14 80 13 91 85 56
19 62 2 56 22 08
67 20 7 05 74 25
19 62 2 58 22 OS
176 12 23 90 200 02
9 30 89 54 6 11 54 95
19 150 Смит, Уильям К. 10 25 2 53 12 78
20150 Адамс, Джон У. * 21 58 7 40 2 53 31 51
22150 Джонс, Джон М. 19 52 2 56 22 08
24150 Эриксон, Карл 39 90 19 52 6 18 65 58
28150 Розенталь, Генри 19 52 2 50 22 08
27150 Сторч, Филип Х.19 52 2 58 22 OS
28 1-50 Btllharlz, Mary Jane 19 52 2 58 22 08
y, 21, 'A 30150 Эриксон, Carl 33 60 70 45 18 17117 22
85 22 5 57 40 79
2 -5 1,2-5 2151 Cllls, Уильям Р. 110 20 19 52 56 86 19 80205 88
28310 5,8 56 225 44 55 95 578 05
7,8 08 7 25 85 88
78 08 * 7 25 85 88
58 58 '5 88 84 24
2, 3, 7, 8, 9,10 152 Свит, Джозеф М. 28181 58 58 '29 50 852 67
18 00 2 44 20 41
19 00 2 62 21 52
21 157 Ассоциация натуралистов-любителей 27 051 9 25 9 76 10 85 56 91
8, 4 157 Ньюкомб, Джон 56 70 89 04 9 22 161 96
47 50 16 85 19 52 18 60 102 27 900 32% 6 157 40 90 84 75 12 95 19 52 18 18126 28
11 157 Нидхэм, Анна В., Estate 19 52 2 56 22 08
12, 18 157 Слебер, Кред 83 95 87 30 29 60 39 01 40 90 '280 70
14, 15 157 Эриксон, Карл 89 01 182 45 19 77 191 26
1, 2158 1 89 04 140 90 22 44 202 38
8, 4 158 77 60 '.9 60 89 04 80 92 177 16
6, 7 158 Саммерс, Элла Э. 220 48 39 01 45 31 251 72
9 158 Альбус, Джордж А. Эмма 19 52 2 56 22 08
10 158 Олдфилд, Сара Дж. 39 00 14 80 19 52 16 01 89 33
12 158 Герке, Гетлтия 19 52 1 56 22 08
28 158 И. Элгб, Оливер Дж. £ 48 , 76 51 01) 15 82 115 68
1, 2, 3 159 Блейкер, Гилберт Х.45 00 4 60 49 60
1-10 включительно 163 Baker, LK 15 SO 97 60 10 '22 121 62
4 6S 1 42 6 10
6, 7, 8 164 Holly Beach Improvement Co. 6 14 6 30 19 52 4 01 36 00
10 161 Старр, Энни, Эстейт 19 52 2 58 22 08
8 165 Спенсер, Гарри А. 19 52 2 56 22 08
7, 8 165 Саут Джерси Транспортейшн Ко 3 10 4 10 39 04 4 95 51 19
39 04 4 12 43 46
117 12 10 37 127 49
10 00 1 80 11 80
3, 4. 5, 9,10 167 Янг, Джеймс, Эстейт 10 50 39 04 5 06 54 60
8, 7 167 Шилдс, W.8. P. 39 04 4 12 43 18
8 167 Holly Beach Improvement Co. 2 05 2 10 19 52 3 04 26 71
8,12, 3,4,5, 8, 9,10 168 Baker, 1 ,. R. 6 00 16 80 58 56 9 17 84 53
9 169 36 70 19 52 5 86 82 08
От 1 до 10 включительно 172 Янг, Джеймс, Эстейт 3 80 15 80 107 итт) 12 27 135 67
5, 6, 7, 8, 9,10 177 Тейлор, Джозеф 107 8 (1 9 60 118 20
Дата, Холли-Бич-Сити, 19 мая 1909 г. Иногда la
Vory Restful.
Когда любой другой орган нашего тела
устает, мы без колебаний отдыхаем
Это, но мало кто отдыхает систематически
■ глаз. Однако они, будучи очень внимательными, нуждаются в особой заботе.
Женщины скажут: «Мои глаза так устали
, что я с трудом могу видеть *. Тем не менее, вместо
, чтобы остановить прекрасное шитье или вышивку,
они сшивают. В полусвете с
нет мыслей о зле, которое последует.
Невозможно для каждого, чьи глаза
устали, прекратить работу
раз, но можно сделать паузу
и закрыть глаза на несколько секунд
унда.Это дает необходимый отдых мышцам
, а привычка, однажды сформировавшаяся,
отложит злой день очков
и счетов окулистов.
Еще один быстрый отдых, далеко уставшие глаза.
Чтобы изредка заглядывать в космос. Ваши
друзей могут обвинить вас в любви
, но кого это волнует, если этим усиливается зрение
.
Женщина, чьи глаза смотрят на постоянное напряжение.Нужно выбрать себе
, что приносит наибольшее облегчение. Один дальний
окулист заявляет, что холодная вода для
детей моложе сорока лет и горячая
вода после этого.
Если глаза постоянно устают,
нужно искать причину. Это может быть
из-за плохого зрения, и следует незамедлительно проконсультироваться с окулистом
.
Нет экономики хуже, чем
дурак с одним зрением.
Часто усталость глаз возникает из-за ухудшения здоровья,
раз - из-за тяжелого функционального расстройства.Один мужчина в течение нескольких месяцев жаловался
на усталые глаза, но игнорировал это как незначительный дискомфорт
, пока, слишком поздно, он
не узнал, что усталость
была вызвана затвердением артерий, а слепота
была неизбежна.
Если ваши глаза постоянно устают,
постарайтесь поддерживать хорошее физическое состояние
с помощью упражнений, диеты и свежего атр. Если
они все еще раздражают, немедленно обратитесь к врачу
.
Трус никогда не прощал; это не природа hla
. - Французская пословица.
Смейся немного BfL
Вот девиз, старайся соответствовать,
«Смейся немножко ML»
Когда ты думаешь, что у тебя проблемы h *
«Смейся немного ML '
Посмотри несчастью в лицо. grtmeoa.
Десять к одному 'саржа дает свое место
Это у вас есть wtt и gilt
Просто чтобы немного посмеяться.
Берегите этот своеобразный подарок.
«Посмейтесь немного ML»
Держите его при себе, образец ft -
"Laugh a Uttte ML"
маленькая мисс, которая обязательно вас ждет.
Fortune может не испытать вас
Hen mar mock'Aod fern * rtffVk na
Уютный одноэтажный дом.План
, который строили много раз - дом
можно хорошо построить примерно за 1800 долларов.
Copyright, 1009, Томис Л. Уэст, Сиэтл, Вашингтон.
** - вид в перспективе - с фотографии.
ПЛАН ЭТАЖА.
• -
Кармен 8ы1ва о правах женщины.
Mis. Walk A Fearn читает лекции в
году в этой стране для слепых, и Inci
на самом деле она рассказывает то, что знает
о доброй королеве бонмании.
Кармен Сильва. Царица не была суфийским фрагистом
, и ее мнения по вопросу
были процитированы следующим образом: «Что касается прав человека
? У нас есть право
страдать, быть терпеливым, работать, помогать,
- быть добродетельными и добродетельными». сделать человека таким.
Чего еще мы хотим? »
Первоначальный план этого колодца -
, уютный и удобный дом, все
на одном этаже и имеющий очертания
бунгало, был построен
раз в разных городах и штатах.
Смета архитектора на строительство
Включает оштукатуренные стены, двойной пол
, газовые и электрические светильники
и фарфоровую сантехнику. Основание
стен из цемента, но без подвала
, так как все 1s предусмотрело
на основном этаже. .Кедровый сайдинг и битумная черепица
. Широкий и глубокий отсек
столовой с боковыми окнами
, расположенными под углом, дает вид в трех направлениях
. Спальни хорошо освещены
ed снаружи, имеют большие туалеты и
много свободного места на стенах. Кухня
размера подходит для небольшого дома и
удобно расположена. Размер 26 на 42 фута;
потолок девять футов. Морилка делает
желательной отделкой для всего интерьера
, за исключением ванной комнаты, которая должна быть покрыта белой эмалью
.Построен из
комплектов, как описано, примерно за 1800 долларов.
ТОМАС Л. УЭСТ, архитектор.
A Saf * THng to Do.
При покупке материала для блузки или платья
также можно получить половину
ярда или около того, с учетом возможных непредвиденных обстоятельств. Если удастся уговорить портниху
вернуть
кусков мусора, дополнительные пол-ярда
могут не понадобиться; также должен ли владелец
быть изготовителем блузки или лифа
, о которых идет речь. Но, конечно,
во многом зависит от стиля и количества купленных
, так как во многих случаях
оставшихся частей недостаточно, чтобы
сделал многое в плане ремонта.
СРЕДИ ЦЕРКВЕЙ
ВОСКРЕСНЫЕ УСЛУГИ В ЦЕРКВЯХ
, ВСЕ КОТОРЫЕ
РАСШИРЯЮТ СЕРДЕЧНЫЙ WEL
ПРИХОДИТ К ПОСЕТИТЕЛЯМ.
ГОЛЛИВУД М.Э. ЦЕРКОВЬ
Комер Робертс и Пасифик-авеню
Ред. Р. С. Карлайл, пастор.
Проповедь пастора в 10.30.
Воскресная школа, 2.30.
Воскресное вечернее богослужение в 7.30
, которому предшествует песенная служба.
Молитвенное собрание ср. Ev'g, 7.30.
Мест бесплатно. Добро пожаловать всем.
* * *
Анолезный м. е. церковь
Rev.Р. 8. Карлайл, пастор
Проповедь каждое воскресенье после обеда
в три часа дня.
Воскресная школа в два часа дня.
Добро пожаловать!
■ t It It
БАПТИСТСКАЯ ЦЕРКОВЬ WILDWOOD
Corner Maple and Pacific Avenue
Утро, 10.30 a. м., воскресная школа
2.30 р. м., Песенный сервиз, 7.IS п. м.
Вечер, 7.30 ч. м. Молитвенное собрание
Вечер четверга, 7.30. Радушный прием
посетителям. Поддерживается
за счет добровольных взносов.
США США
БАПТИСТСКАЯ ЦЕРКОВЬ АНОЛЕСИКИ
Ред.Леванус Майерс, пастор.
Проповедь каждое воскресенье вечером в
8.00
Воскресная школа в 2.30 п. м.
Молитвенные собрания по средам и
часа в 7.30.
США США
ST. МИССИЯ ДЖЕЙМСА ПЕРВОГО КРЕСТИТЕЛЯ
Corner Lincoln and Arctic avenue
Holl., Beach, N.J. •
Преподобный Джеймс Х. Форман, пастор
Службы каждое воскресенье в 11.30. м
и восемь р. м. Встреча молодежи
за час до воскресной вечерней службы
. Воскресная школа в 2.30. A1
добро пожаловать.Места свободные.
США США США
ХОЛЛИ-БИЧ ПРЕСБИТЕРИАНСКАЯ ЦЕРКОВЬ
Корнер Пасифик и Берк-авеню
Холли-Бич.
Службы каждое воскресенье с проповедью пастора
, в 10.30. Воскресная школа №
2.30. Проповедь пастора 8.0 (1
Молитвенное собрание каждую среду,
, вечер, в 8.00.
Rev. 8. А. Харкер, AM, пастор.
nn *
ПРОТЕСТАНТ СВЯТОГО СИМЕОНА
\ ЭПИСКОПАЛЬНАЯ ЦЕРКОВЬ
Corner Pacific and Maple avenue
Wildwood, NJ
Служба следующая: Святая община
ion at 7.30 а. м. Утренняя служба и
Serm $ n в 10.30. Вечерняя служба и
eenSou arv.30. = Suiiuay school ', 2.30;
Обслуживание в будние дни, как было объявлено. Преподобный
Сэмюэл Уорд, Б. Д., ректор, резиденция,
121 Мэйпл-авеню.
США США США
ЛЮТЕРАНСКАЯ ЦЕРКОВЬ СВЯТОЙ
ТРОИЦЫ
Часовня Святой Троицы, Cor Atlantic
и Тополевые проспекты.
Утреннее служение, 10.45.
Вечерний сервиз 7,45 л. м.
Воскресная школа 9.30 а. м.
Преподобный Л. Г. Дейли, пастор.
Приветствие посетителей
NORTH WILDWOOD SERVICES
Проводится в пожарной части, 18-я и Нью-
Джерси-авеню.
Воскресная школа в 2.30.
Christian Endeavour, воскресенье вечером
7.30. Всех приветствую.
IS IS IS
ST. РИМСКАЯ КАТОЛИЧЕСКАЯ ЦЕРКОВЬ АНН
Римско-католическая церковь Св. Анны на углу проспекта Гарфилд и Пасифик
, угол
, Холли-Бич, штат Нью-Джерси,
, воскресенье в 9 часов утра. м. После
1, 6 и 10 июня. Воскресная школа
в 2 часа. Преподобный отец Марони,
Ректор,
IS IS IS
космополитическая церковь (цветная)
Holly Beach ave., Угол Янга
Rev.Дж. 8. Купер, пастор
Служение в День Господа:
Проповедь в 10.30 и 20.00.
Детская служба, 14.30.
Христианское стремление, 7.30 с. м.
IS IS IS
Шведское представительство, Дэвис авеню, преп.
W. Haggwist. Проповедь Воскресенье
утро, 11 часов, вечер 7.30
Четверг вечером, 8 часов. Приглашаются все, кто понимает шведский.
IS IS IS
ХРИСТИАНСКАЯ НАУКА
Службы проводятся по воскресеньям в 10.30. м.
в районе Холли-Бич Боро-Холл, кор.
нер Монтгомери и проспект Пасифик
Приглашаем всех принять участие.Массаж лица и
Лечение кожи головы ....
Общий и шведский массаж
Hotel Thelma, Cedar Avenue
Hhone 260 Wildwood, N. J.
Ias. е. rakestraw
J Slew WRITER
■ 10 East Pine Avenue
Phjone 41 Y
JAMES McLINDEN Генеральный подрядчик
Цементные и канализационные работы - специальность
Все работы гарантированы
Третья и Центральная проспекты. Англси, штат Нью-Джерси
! Бернард Троннем $
ЛАНДШАФТ САДОВОД ■ ГЕНЕРАЛЬНЫЙ ПОДРЯДЧИК
Создатель газонов. Уход за газонами и садами
Летом
ПОЧТОВЫЙ ЯЩИК 234 WILDWOOD.N.J.
Новый Центр Дом, ЮО
Отапливается во всем. Главная Таблица
Термины разумные. Стол с свежей рыбой и овсяными хлопьями из наших вод
MRS. С. БАРНЕТТ
13. С. ИНГЕРСОЛЛ
ПОХОРОННЫЙ ДИРЕКТОР
Холли-Бич, Нью-Джерси
Леди Бальзамировщик на все случаи жизни, где это необходимо
Тела, доставленные из отелей и коттеджей в мои похоронные бюро на Пасифик-авеню
nue и хранящиеся до погребения или подготовленные для То же по законам штата и
отправлены в любую точку мира.Vildwood, N. J
I
Вы сэкономите деньги, купив асбестовую кровлю
из
H. L. ADAMS
324 E. Commerce 8t., Bridgeton, N. J
Cor. I8-я и Нью-Джерси-авеню,
-Норт-Вайлдвуд— •• -
Сантехника и отопление
Дренаж и вентиляция
Работа с оловом и листовым чугуном.
Л. Дж. Маккормик
WILDWOOD. Н. Дж.
ГЕНРИ КУМБС
Агент по недвижимости
Офис: Здание журнала. Второй этаж
Wildwood. N. J.
Меблированные коттеджи в аренду на
Сезон
JOHN M.ВАНС,
ХОЛЛИ-БИЧ, Н. /.
Здания любого типа перемещены на
быстро и с осторожностью.
Сортировка по разумным ценам
Нью-Йорк и Филадельфия
Магазин обоев
W. GRACE & SONS
Обычные и декоративные
Печатные машины.
Упаковочная бумага и бумажные пакеты
Готовые шторы для окон
и изготовление на заказ
Сосновый проспект, 137, Вайлдвуд. N. J.
ПРИНИМАЕТЕ ЖУРНАЛ?
В ИНТЕРЕСАХ КАЖДОГО
человека, владеющего домом или участком на Пяти-Майл-Бич, до
взять журнал.В его столбцах вы найдете
в течение года, много интересного, и
, которые представляют ценность для вас по пустяковой цене в один доллар за
год. Если вы еще не взяли Журнал, вырежьте
и заполните следующий купон, прилагая чек или купюру в один доллар
, и отправьте его по почте в «Журнал, Уайлдвуд,
Кейп-Мэй, округ Нью-Джерси».
E. YENNEY
НЕДВИЖИМОСТЬ
Магазины, коттеджи и участки
- Продажа arM Rent, -Angle ■ - море
, Wildwood, Holly Beach
и Crest.. ' . ’. *
Офисы: 138 Burk Avenue
& Roberts Ave. G? Boardwalk
ХОЛЛИ-БИЧ, Нью-Джерси
D. POWELL
Дилер в продуктовых магазинах
и продовольственных товарах
Уайлдвуд-авеню, напротив здания журнала
Прекрасный выбор чистого домашнего желе
. Необычные
Торты, специи и деликатесы
в сезон. Дайте нам испытание.
Соответствующие цены Качество Правильное обслуживание
McKean & meehan
Цементный кирпич и блоки
всех размеров и видов. ..
Цементные фундаменты и тротуары сданы по короткому уведомлению

Mr.Михан является экспертом по работе с цементом
| и изготовил белый прессованный кирпич
в Филадельфии в 1888 году: завод
, Железная дорога и Линкольн-авеню,
Адрес Капитан Т. П. Маккин,
ХОЛЛИ-БИЧ, Н. Дж.
_190
ДЖЕД ДЮБУА. Издательство
FIVE MILE BEACH JOURNAL. WILDWOOD, N.J.
Пришлите мне ЖУРНАЛ на один год, или к которому прилагается находка 1,00 долл. США
Имя__
Номер и улица_
Город
Штат_

Команда

UD Mock Trial проходит региональные соревнования и направляется на чемпионат серии

1:59 с.м., 15 марта 2013 г. — Команда пробных испытаний Университета Делавэра выйдет на турнир серии первого раунда чемпионата Американской ассоциации пробных испытаний (AMTA), который состоится 23-24 марта, после впечатляющего выступления на региональном турнире.

16-17 февраля команда

UD соревновалась с несколькими другими школами в колледже Элизабеттаун (Пенсильвания). Команда А осталась непобежденной, получив право на выход в следующий раунд. Хотя команда B не перейдет в следующий раунд, они были конкурентоспособны на встрече, выиграв три бюллетеня.

Национальная медаль науки

Президент Барак Обама недавно вручил Национальную медаль науки выпускнику Делавэрского университета Ракешу Джайну.

Премия Уоррена

Розалинд Джонсон, заместитель декана по программе NUCLEUS Колледжа искусств и наук Университета штата Вашингтон, была вручена награда Джона Уоррена за выдающиеся достижения в области лидерства и обслуживания во время церемонии 26 мая.

Соревнуясь с командами из Гарвардского университета, Джорджтаунского университета, колледжа Патрика Генри и Университета Ла Саль, команда UD Mock Trial достигла самых впечатляющих результатов на сегодняшний день.

«Студенты проделывают потрясающую работу», — сказал Мартин О’Коннор, заместитель генерального прокурора Генеральной прокуратуры в Уилмингтоне и тренер команды UD Mock Trial. «Их успех, очевидно, является результатом всей их напряженной работы».

AMTA в феврале проведет несколько региональных турниров по всей стране. Семь лучших команд из каждого регионального турнира переходят в Серийный турнир первого раунда чемпионата. Если команда пробного испытания UD войдет в число шести лучших команд в первом раунде, они перейдут в турнир национального чемпионата в апреле.

«Мы отправились на региональный турнир с очень большими надеждами, — сказал юниор Райан Леонард, президент команды. «Мы знали, что там будут несколько сильных команд, но нам удавалось выиграть все дела».

AMTA выпускает в начале года один случай, с которым каждая команда работает на протяжении всего соревновательного сезона.

Дело этого года, обнародованное в августе 2012 года, представляет собой гражданское дело с участием молодой пары, совершающей подводное плавание.

«Один из них умер во время поездки, поэтому вопрос в том, кто действовал безрассудно», — сказал Эндрю Доннелли, второкурсник по специальности политология.

Краткое описание содержит подробности дела, показания свидетелей и правила представления доказательств.

«Наша работа — изображать как защиту, так и обвинение, и свидетелей по каждому делу», — сказал Леонард.

И Леонард, и Доннелли получили награды на региональном конкурсе как лучший свидетель и лучший поверенный соответственно.

«Разница между последним соревнованием и предстоящим соревнованием состоит в том, что имитация пробной ассоциации сильно меняет историю, поэтому ученикам приходится приспосабливаться к этим изменениям», — сказал О’Коннор.

Чтобы приспособиться к игре в кривую, команда придерживается строгого графика тренировок.

«Модифицированная версия корпуса сильно отличается. Мы перестраиваем вещи с нуля и продолжим практиковаться каждый день », — сказал Леонард.

Независимо от того, что происходит в первом раунде, тяжелая работа команды пробного испытания приносит свои плоды.

«Это дает возможность развить ряд ценных навыков, таких как публичные выступления и критическое мышление», — сказал Доннелли.«Очевидно, что это выгодно, если вы собираетесь подавать в суд, но я думаю, что это хороший опыт, даже если вы этого не сделаете».

«В любом случае это должен быть хороший опыт, у нас сильная, молодая команда», — сказал он.

Статья Келли Брегенцер

Метабаркодирование ДНК скоплений ихтиопланктона Амазонки

PLoS One. 2017; 12 (1): e0170009.

, 1 , 1 , 2, 3 , 2, 3 , 4 , 2, 3 , 3, 5 , 6 4 , 7 и 1, *

M.Э. Маджия

1
Institut de Recherche pour le Développement, Université de Montpellier, Unité Mixte de Recherche Diversité Adaptation et Développement des Plantes (UMR DIADE), Монпелье, Франция

Y. Vigouroux

1
Institut de Recherche pour le Développement, Université de Montpellier, Unité Mixte de Recherche Diversité Adaptation et Développement des Plantes (UMR DIADE), Монпелье, Франция

J. F. Renno

2
Institut de Recherche pour le Développement, Unité Mixte de Recherche Biologie des Organismes et Ecosystèmes Aquatiques (UMR BOREA), MNHN — CNRS-7208 — UPMC — UCBN — IRD-207, Монпелье, Франция

3
Laboratoire Mixte International — Evolution et Domestication de l’Ichtyofaune Amazonienne (LMI — EDIA), IIAP — UAGRM — IRD, UMR BOREA, 7 rue Cuvier, CP 32, Paris, France

F.Дюпоншель

2
Institut de Recherche pour le Développement, Unité Mixte de Recherche Biologie des Organismes et Ecosystèmes Aquatiques (UMR BOREA), MNHN — CNRS-7208 — UPMC — UCBN — IRD-207, Монпелье, Франция

3
Laboratoire Mixte International — Evolution et Domestication de l’Ichtyofaune Amazonienne (LMI — EDIA), IIAP — UAGRM — IRD, UMR BOREA, 7 rue Cuvier, CP 32, Paris, France

E. Desmarais

4
Institut des Sciences de l’Evolution (UMR ISEM), Université Montpellier — CNRS — IRD — EPHE, Place Eugène Bataillon — CC 065, Монпелье, Франция

J.Нуньес

2
Institut de Recherche pour le Développement, Unité Mixte de Recherche Biologie des Organismes et Ecosystèmes Aquatiques (UMR BOREA), MNHN — CNRS-7208 — UPMC — UCBN — IRD-207, Монпелье, Франция

3
Laboratoire Mixte International — Evolution et Domestication de l’Ichtyofaune Amazonienne (LMI — EDIA), IIAP — UAGRM — IRD, UMR BOREA, 7 rue Cuvier, CP 32, Paris, France

C. García-Dávila

3
Laboratoire Mixte International — Evolution et Domestication de l’Ichtyofaune Amazonienne (LMI — EDIA), IIAP — UAGRM — IRD, UMR BOREA, 7 rue Cuvier, CP 32, Paris, France

5
Instituto de Investigaciones de la Amazonía Peruana (IIAP), Laboratorio de Biología y Genética Molecular (LBGM), Икитос, Перу

F.М. Карвахаль-Валлехос

6
FAUNAGUA, ULRA-UMSS, ECOSINTEGRALES SRL, Кочабамба, Многонациональное Государство Боливия

E. Paradis

4
Institut des Sciences de l’Evolution (UMR ISEM), Université Montpellier — CNRS — IRD — EPHE, Place Eugène Bataillon — CC 065, Монпелье, Франция

J. F. Martin

7
Монпелье-СупАгро, Центр биологии для управления популяциями (UMR CBGP), Монферье-сюр-Лез, Франция

C.Мариак

1
Institut de Recherche pour le Développement, Université de Montpellier, Unité Mixte de Recherche Diversité Adaptation et Développement des Plantes (UMR DIADE), Монпелье, Франция

Peng Xu, Editor

1
Institut de Recherche pour le Développement, Université de Montpellier, Unité Mixte de Recherche Diversité Adaptation et Développement des Plantes (UMR DIADE), Монпелье, Франция

2
Institut de Recherche pour le Développement, Unité Mixte de Recherche Biologie des Organismes et Ecosystèmes Aquatiques (UMR BOREA), MNHN — CNRS-7208 — UPMC — UCBN — IRD-207, Монпелье, Франция

3
Laboratoire Mixte International — Evolution et Domestication de l’Ichtyofaune Amazonienne (LMI — EDIA), IIAP — UAGRM — IRD, UMR BOREA, 7 rue Cuvier, CP 32, Paris, France

4
Institut des Sciences de l’Evolution (UMR ISEM), Université Montpellier — CNRS — IRD — EPHE, Place Eugène Bataillon — CC 065, Монпелье, Франция

5
Instituto de Investigaciones de la Amazonía Peruana (IIAP), Laboratorio de Biología y Genética Molecular (LBGM), Икитос, Перу

6
FAUNAGUA, ULRA-UMSS, ECOSINTEGRALES SRL, Кочабамба, Многонациональное Государство Боливия

7
Монпелье-СупАгро, Центр биологии для управления популяциями (UMR CBGP), Монферье-сюр-Ле, Франция

Университет Сямэня, КИТАЙ

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.

  • Концептуализация: JFR FD YV CM.

  • Формальный анализ: MEM CM YV EP FD.

  • Получение финансирования: JFR FD JN CGD YV.

  • Расследование: MEM CM YV JFR JN FD.

  • Методология: YV CM ED JFM.

  • Администрация проекта: CM YV JFR FD CGD.

  • Ресурсы: CGD FD JFR JN FC.

  • Контроль: CM YV JFR FD CGD.

  • Проверка: MEM CM YV JFR FD ED JFM EP.

  • Визуализация: MEM CM.

  • Написание — первоначальный черновик: MEM CM YV JFR FD.

  • Написание — просмотр и редактирование: MEM CM YV JFR FD ED CGD EP JFM JN.

Поступила 2 августа 2016 г .; Принято 25 декабря 2016 г.

Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.Эта статья цитировалась в других статьях в PMC.

Дополнительные материалы

S1 Дополнительная информация: NMDS-ординация предполагаемых частот личинок, март-октябрь 2014 г., 8 месяцев. (PDF)

GUID: AAA1DA89-FD4E-4602-A974-60231BEF8DB4

S1 Table: Подробная информация об использованных образцах. (XLSX)

GUID: C502C969-0309-4B54-878A-CE5599A15CBD

S2 Таблица: Список последовательностей Сэнгера, использованных в этом исследовании. (XLSX)

GUID: DE5674FD-ECEA-410E-A6C5-07CECE27F2A0

S3 Таблица: Матрица генетического расстояния между зондами и идентифицированными видами.(XLSX)

GUID: 70496BD3-2B65-4EDA-8ACC-1D499ED8CED5

S4 Таблица: Ежемесячная частота отбора проб в реке Укаяли с марта по октябрь. (XLSX)

GUID: 6E930A50-90C1-4CC4-839E-3207269190D4

Таблица S5: Последовательности (89), используемые в эталонной базе данных с соответствующим идентификатором GenBank. (XLSX)

GUID: 53D41510-BE4F-43E3-86F6-9705984497E9

S1 Text: Используемые командные строки и программное обеспечение. (SH)

GUID: DDACFF71-AA3A-43A7-8EB7-BF9D7D798215

Заявление о доступности данных

Последовательности ДНК доступны в Dryad с DOI (10.5061 / дриада.117тн).

Abstract

Тропические леса обладают необычайным биоразнообразием. Считается, что в бассейне Амазонки обитает 30% всех видов речных рыб в мире. Информация об экологии, воспроизводстве и пополнении большинства видов все еще отсутствует, что препятствует управлению рыболовством и успешным стратегиям сохранения. Одним из ключевых малоизученных вопросов при изучении динамики популяции является набор. Экология личинок рыб в тропических биомах все еще находится в зачаточном состоянии из-за трудностей идентификации.Молекулярные методы — очень многообещающие инструменты для идентификации личинок на уровне видов. Однако одним из их ограничений является получение отдельных последовательностей с большими выборками личинок. Чтобы облегчить эту задачу, мы разработали новый метод, основанный на возможности массового параллельного секвенирования секвенирования следующего поколения (NGS) в сочетании с гибридизационным захватом. Мы сосредоточились на митохондриальном маркере цитохромоксидазы I ( COI ). Результаты, полученные с помощью нового метода, сравнивали с индивидуальным секвенированием личинок.Мы подтвердили способность этого метода идентифицировать личинок амазонского сома на уровне видов и оценивать относительную численность видов в партиях личинок. Наконец, мы применили этот метод и предоставили доказательства сильных временных вариаций репродуктивной активности видов сома в реке Укаяли в перуанской Амазонии. Этот новый экономически эффективный метод позволяет получать большие массивы данных, открывая путь к более глубокому пониманию репродуктивной динамики и моделей пополнения тропических видов рыб, что имеет серьезные последствия для управления рыболовством и его сохранения.

Введение

Считается, что в бассейне Амазонки обитает 30% всех видов речных рыб, описанных на сегодняшний день [1]. Это исключительное богатство видов рыб синхронизирует свое воспроизводство, чтобы получить выгоду от вполне предсказуемого годового режима наводнения в бассейне Амазонки (концепция импульсов наводнений, [2]). Ежегодное наводнение увеличивает доступность пищи для личинок и молоди рыб и способствует их расселению [3,4]. Затопленные поймы также служат убежищем как для родителей, так и для молодняка [2, 4–5].Для мигрирующих рыб исключительные размеры и сложность гидрографической сети Амазонки обеспечивают большое количество путей распространения икры и личинок [6,7]. Следовательно, изучение их вербовки затруднено. Эти перелетные виды рыб составляют более 80% промысловых уловов в бассейне Амазонки, и большинство из них относятся к отрядам Characiformes и Siluriformes (сомы) [8–10]. Некоторые из наиболее важных видов сомов, в частности самый крупный вид из рода Brachyplatystoma , уже подвергаются чрезмерной эксплуатации [11–15].Среди этого рода Brachyplatystoma rousseauxii совершает самую длинную миграцию, известную в пресных водах, — 5500 километров [16]. Взрослые особи размножаются в предгорьях Анд в Боливии, Колумбии, Эквадоре и Перу. Затем личинки дрейфуют вниз по течению в свои рассадники в устье Амазонки, где они растут, прежде чем мигрировать вверх по течению, чтобы присоединиться к размножающимся взрослым особям в верховьях [14–18]. Этому жизненному циклу миграции на большие расстояния угрожает деятельность человека, в частности перелов и строительство плотин гидроэлектростанций, которые могут резко ограничить пополнение личинок и, следовательно, возобновление рыбных ресурсов.Таким образом, понимание репродуктивных циклов и динамики пополнения коммерчески важных мигрирующих видов имеет важное значение для устойчивого управления рыболовством в Амазонии. Регулярный стандартизированный отбор проб планктонной сети у личинок этих видов является многообещающим способом достижения этих целей. Одним из технических ограничений этого подхода является конкретная идентификация личинок пресноводных рыб, особенно личинок Siluriformes, учитывая большое количество видов в этом порядке. Одни только морфологические критерии на ранних стадиях развития позволяют дифференцировать только семейства, а иногда и роды, но очень редко — виды [19,20].С развитием специализированных баз данных и стандартизацией молекулярных инструментов молекулярные подходы, такие как штрих-кодирование ДНК, предлагают решение этой проблемы. Этот метод уже успешно применялся для идентификации взрослых силуриформ [21–23]. Позже этот подход был расширен до идентификации личинок [24,25] с использованием индивидуального секвенирования по Сэнгеру. Этот подход очень надежен, но он может быстро стать обременительным, когда необходимо идентифицировать несколько тысяч личинок. Поэтому мы разработали альтернативную стратегию с использованием высокопроизводительного секвенирования партий личинок.Наши основные цели состояли в том, чтобы оценить, может ли этот подход 1) извлечь все различные виды в смеси личинок и 2) количественно оценить относительные доли видов в партии. Методы, основанные на ПЦР, могут приводить к смещенной амплификации ДНК различных видов и искусственно понижать представленность в окончательных подсчетах [26–28]. Следовательно, мы разработали основанный на гибридизации метод для захвата обычно используемого маркера штрих-кода ДНК: части гена цитохромоксидазы 1 ( COI ).Митохондриальный молекулярный маркер COI (600 п.н.) был выбран за его способность различать рыб [29–32]. Наш подход также позволяет проводить одновременный анализ нескольких партий личинок, что дополнительно снижает усилия по секвенированию. Более того, очень легко экстраполировать доказательство концепции на одном маркере на несколько маркеров, целые митохондрии или даже несколько тысяч ядерных генов [33].

Материалы и методы

Район исследования и отбор проб

В 2013 и 2014 годах пробы личинок (ихтиопланктон) были отобраны в трех притоках реки Амазонки: Напо, Укаяли и Мараньон в Перу (список проб см. В таблице S1. ).Партнер Французского национального института исследований в области устойчивого развития (IRD), Instituto de Investigaciones de la Amazonia Peruana (IIAP) по праву уполномочен правительством Перу на изучение и выборку биоразнообразия перуанской Амазонки. Офис DIREPRO « Региональный директ по продукции дель Гобьерно региональный де Лорето » разрешил экспорт личинок рыб в лаборатории IRD во Франции. Пробы ихтиопланктона отбирались при дневном свете путем буксировки ихтиопланктонной сети за лодкой с подвесным мотором, поддерживаемым в статическом положении.В протоколе использовались конико-цилиндрические сетки длиной 1,5 м с диаметром отверстия 0,6 м и размером ячеек 1 мм или 0,3 мм в зависимости от образца, каждая сетка содержала коллектор на конце. Использовалась либо одна сеть, либо три сети, расположенные вертикально с расстоянием 2 м между каждой. Сети буксировали в течение 15 минут пять раз в день в течение двух дней. Личинок фиксировали в 96% растворе этанола и сушили непосредственно перед экстракцией ДНК в соответствии с процедурой, опубликованной Sambrook et al .[34].

Образец личинок

Мы использовали два образца, один из реки Напо и один из реки Мараньон, для проверки метода. Две выборки личинок случайным образом разделили на две подгруппы. Одна подгруппа использовалась для экстракции ДНК от каждой отдельной личинки (270 личинок из Мараньона и 102 личинок из Напо). Часть экстрагированной ДНК была объединена в эквимолярных количествах для образования двух образцов, названных Mar-mock-NGS (для личинок Marañon) и Nap-mock-NGS (для личинок Napo).Во втором подмножестве тотальная ДНК была экстрагирована с использованием всех личинок вместе для Мараньона (250 личинок) и для Напо (373 личинки), чтобы сформировать две объемные пробы, Mar-bulk-NGS и Nap-bulk-NGS для Marañon и Napo. личинки соответственно.

Каждую личинку из первой подгруппы секвенировали индивидуально по Сэнгеру. Мы назвали результаты секвенирования по Сэнгеру Napo и Marañon Nap-S и Mar-S соответственно. Секвенирование имитационных и объемных образцов проводили с использованием платформы Illumina.

Амплификация COI и секвенирование по Сэнгеру

Фрагмент 680 п.н. гена COI амплифицировали с использованием универсальных праймеров Fish F1 и Fish R1 и в условиях ПЦР, как описано ранее Hubert et al .[29]. ПЦР выполняли с использованием смеси Phusion® High-Fidelity PCR Master Mix (ThermoFisher, 1040–2678) с использованием следующей программы: 3 минуты при 98 ° C, затем 30 циклов по 80 секунд при 98 ° C, 45 секунд при 55 ° C и одну минуту при 68 ° C, с последним продлением на 10 минут при 72 ° C. Продукты ПЦР секвенировали с использованием набора BigDye Terminator 3.1 (Applied Biosystems). Секвенирование выполняли на призме 3130 ABI (Applied Biosystems) в IRD Montpellier (Франция) с использованием праймера Fish F1. Последовательности доступны на дриаде doi: 10.5061 / dryad.117tn (см. Таблицу S2).

Подготовка библиотеки

Подготовка биотинилированных ПЦР-зондов для захвата. COI Зонды были получены с помощью ПЦР с использованием тех же условий, что и выше, но с 5’-биотинилированными праймерами, синтезированными Eurogentec SA (Анже, Франция). Амплификацию проводили на четырех взрослых особях четырех разных видов: Oxydoras niger (oni), Pimelodella sp . (pgra), Pinirampus pirinampu (ppi) и Pseudoplatystoma punctifer (ppu).Четыре вида были отобраны для охвата панели силурийидных видов, представленных в нашей базе данных, с диапазоном расхождения нуклеотидов 20%. Зонды ПЦР очищали и объединяли при эквимолярных концентрациях для захвата.

Подготовка и захват библиотеки выполнялись, как описано в Mariac et al . [33]. Библиотеки были помечены с использованием олигонуклеотидов длиной 6 пар оснований (TAG) для обеспечения мультиплексирования, а затем гибридизированы с зондами, нацеленными на COI , как описано в Mariac et al .[33]. Вкратце, тотальную ДНК разрезали с использованием ультразвукового устройства Covaris E220 (Covaris, Woburn, Массачусетс, США), ремонтировали концы, лигировали и заделывали зазубрины перед проведением ПЦР перед гибридизацией. Эти продукты были смешаны и гибридизированы с зондами, меченными биотином. Комплексы стрептавидин-биотинилированные зонды-мишени иммобилизовали на магнитном поле в течение 3 мин. стадия денатурации при 96 ° C для элюирования фракции обогащенной библиотеки. Необогащенную библиотеку также получали в качестве контроля с использованием геномной ДНК из подмножества образца Napo 2013.Эта библиотека использовалась для оценки эффективности метода захвата. Концентрации библиотек были количественно определены с помощью кПЦР (Kappa Biosystems), после чего было выполнено секвенирование парных концов с использованием реагентов MiSeq v2 и 2 × 150 п.н. на платформе Illumina MiSeq v3 в помещениях CIRAD (Монпелье, Франция).

Анализ данных

Мы создали базу данных с последовательностями генов COI из 86 взрослых силуриформ, на которые имеются ссылки в различных коллекциях или публикациях (см. Таблицу S5) и для которых филогенетические отношения установлены и обсуждаются в Carvajal et al.[35]. 86 использованных последовательностей COI были депонированы в GenBank (см. Таблицу S5). Эта база данных содержит только виды, имеющие экономическое значение в Амазонии, и, следовательно, не включает все роды Siluriformes. База данных позволила идентифицировать виды образцов путем сопоставления последовательностей с таковыми в эталонной базе данных.

Последовательности, полученные с использованием метода Сэнгера, исследовали с помощью программного обеспечения Geneious Pro 4.8.5 [36]. Автоматическая фильтрация включала обрезку областей с вероятностью ошибки более 5% на базу.Последовательности были проверены вручную, и все неясности исправлены. Последовательности были выровнены со справочной базой данных с помощью MUSCLE (100 итераций, [37]). Наконец, распределение видов было вычислено путем построения дерева соединения соседей с использованием генетических расстояний Тамура-Нея.

Последовательности, полученные с помощью метода NGS, были демультиплексированы с использованием сценария «demultadapt» (доступного по адресу https://github.com/Maillol/demultadapt), который сортирует чтения в соответствии с их TAG (6 бит / с, порог несоответствия 0). Адаптеры были удалены с помощью Cutadapt 1.2.1 со следующими параметрами: длина перекрытия = 7 п.н., размер вставки = 35 п.н. Чтения были обрезаны на основе их среднего качества нуклеотидов (Q <30) с использованием скрипта «среднее-качество фильтра» (доступно по адресу https://github.com/SouthGreenPlatform/arcad-hts/blob/master/scripts/arcad_hts_2_Filter_Fastq_On_Mean_Quality.pl ). Затем последовательности были отображены в эталонной базе данных с использованием пакета BWA mem v.0.7.12 [38,39]. Для каждой обогащенной библиотеки мы рассчитали 1) процент полезных чтений, т.е.отношение количества чтений, отображенных в базе данных, к общему количеству чтений, и 2) X-кратное обогащение, которое соответствует отношению числа чтений из обогащенной библиотеки, сопоставленной с эталонной библиотекой, к количеству чтений из необогащенной (геномной) библиотеки, сопоставленной с эталонной библиотекой. X-fold измеряет эффективность (обогащение) эксперимента. Процент полезных чтений измеряет специфику обогащения.

Поскольку мы создали основную часть ДНК видов, которые смогли идентифицировать с помощью секвенирования по Сэнгеру, мы знали, какие виды мы ожидали найти, используя подход NGS.Таким образом, мы смогли идентифицировать ложноположительные результаты, то есть виды, обнаруженные с использованием подхода NGS, которые не присутствовали в основной массе ДНК. Использовались только правильно спаренные считывания с максимум одним несоответствием, без отсечения и без вторичного совмещения с эталоном. При выравнивании применялись разные фильтры: сохранялись только последовательности, для которых чтения R1 и R2 были сопоставлены с одним и тем же видом в базе данных, и мы оставили только те, которые были сопоставлены с качеством> 0 (MAPQ> 0), только последовательности с строго меньше двух несовпадений и выравнивание более 100 п.н.Данный вид был идентифицирован путем перечисления референсных последовательностей, с которыми отфильтрованные считывания были сопоставлены с минимальным охватом 60%, в противном случае мы сочли, что это недостаточно точно для идентификации на уровне видов, и сохранили только таксономический ранг рода. Частота встречаемости каждого идентифицированного вида рассчитывалась путем деления относительного числа отображенных считываний на общее количество отображенных считываний по видам. Наконец, состав и частоты, полученные в результате секвенирования по Сэнгеру и секвенирования NGS, сравнивались для подтверждения метода захвата.Корреляции продукта и момента Пирсона были рассчитаны с помощью R 3.2.5 [40].

Исследование разнообразия

Здесь мы описываем тематическое исследование, в котором новый метод секвенирования оценивался в течение восьми месяцев. Для оценки состава силуриформ в образцах, собираемых ежемесячно в реке Укаяли в период с марта по октябрь 2014 г. (см. Таблицу S1), мы выполнили массовую экстракцию ДНК и использовали метод захвата NGS на восьми образцах для получения данных о последовательности.

Результаты

Идентификация видового состава

Маркер COI был успешно секвенирован по Сэнгеру для 270 и 102 личинок из рек Мараньон и Напо, соответственно.Силуриформным видам соответствовало 168 последовательностей. Всего 158 последовательностей были очень близки или идентичны 86 видам из нашей базы данных. Десять последовательностей демонстрируют некоторое отклонение от этих 86 видов. Эти десять последовательностей были избыточными и были сужены до трех различных последовательностей. Эти три последовательности были добавлены к нашему набору данных, поскольку мы думали, что они могут представлять либо три описанных вида, которые еще не секвенированы, либо три новых вида. Они получили названия Pimelodidae_Pimelodus_spA-C34 , Pimelodidae_Hypophthalmus_sp . C95 и Pimelodidae_Hypophthalmus_sp . А289 . Таким образом, окончательная база данных содержала 89 последовательностей (). На основе пересмотренного набора справочных данных методом Сангера было идентифицировано 11 различных видов в пробе реки Мараньон (Mar-S) и 10 различных видов в пробе реки Напо (Nap-S) ().

Соседнее дерево, построенное из 89 последовательностей видов Pimelodidae.

89 последовательностей соответствуют всем лицам, присутствующим в нашей базе данных, и дерево было построено в соответствии с моделью Тамура-Неи.Звездочки обозначают четыре вида, использованные для производства ПЦР-зондов, а цветные полосы показывают пропорции каждого вида в двух образцах, полученных с использованием двух методов секвенирования.

Таблица 1

Данные о выравнивании последовательностей COI для образцов Напо и Маранон.

В таблице приведены результаты и оценочная частота встречаемости каждого вида, идентифицированного с использованием секвенирования следующего поколения (NGS) и подхода Сэнгера. Для подходов следующего поколения был приготовлен «макет» с эквимолярной ДНК от каждой личинки и «основной» с ДНК, выделенной из партии личинок.Количество считываний, процент несовпадений, процент базового покрытия, средняя глубина покрытия, максимальное покрытие и оценочная частота даны для каждого вида. Для подхода Сэнгера (Nap-S, Mar-S) указывается количество секвенированных особей и частота встречаемости видов. Обозначены виды, включая название семейства «Family_Genus_species». Когда покрытие считалось низким (ниже 60%), данные подчеркнуты, а идентификация дается только на уровне рода (обозначается Family_Genus_ (разновидности) _spX).

охват (%)

9 70970970

9098

.

4

90ODIM ) spX

85

0

Bulk -NGS

9

0985

9070

03 11,5

Виды Mar-Mock-NGS Mar-Sanger Mar- Bulk-NGS
Количество считываний с несоответствием Bases Средняя глубина охвата Максимальная глубина охвата Расчетная частота (%) Отдельные лица Частота (%) Количество считываний Несоответствие (%) Базы с охватом (%) Средняя глубина покрытия Максимальная глубина покрытия Расчетная частота (%)
Pimelodidae Brachyplatystoma vaillanti 1,128 0.2 99,3 234,4 718,0 56,1 41 62,1 1,933 0,3 99,3 401,8 1,20985HHALUS 1,20985 123 0,2 97,5 24,8 85,0 6,1 5 7,6 84 0,2 97,7 17,3 0 3,5
Pimelodidae Pseudoplatystoma tigrinum 277 0,1 98,7 58,7 108,0 13,8 1 108,2 13,8 1 9098 1,5

9098 909 9098 5 9070

5,0 0,2
Pimelodidae Brachyplatystoma filamentosum 76 0,1 100,0 16,0 37.0 3,8 7 10,6 76 0,1 96,5 16,0 35,0 3,2
Pimelodidae 8

9

5,0 0,4 1 1,5 0 0,0
Pimelodidae Pimelodus blochii 73,9 8,0 27,0 1,9 1 1,5 0 0,0
Puso 0,0 42,6 3,4 16,0 0,8 1 1,5 0 0.0
Pimelodidae Hypophthalmus sp . C95 21 0,2 85,0 4,7 10,0 1,0 1 1,5 0 6 0,1 28,9 1,3 6,0 0,3 1 1.5 7 0,1 45,3 1,4 6,0 0,3
Pimelodidae Pimelodus (spA-C34) spX 1 0,7 1 0,7 1 0,7

0,1 1 1,5 0 0,0
Pimelodidae Hypophthalmus sp . A289 317 0.2 100,0 71,1 114,0 15,8 6 9,1 18 0,2 98,0 3,9 9,0 0 0,0 0 0,0 215 0,2 98,7 45,2 89,0 9.0
Pimelodidae Pimelodina flavipinnis (46) 0 0,0 0 0,0 9070 9709 9070

9070 9070 1,8

Pimelodidae Sorubim sp . (76) 0 0,0 0 0.0 10 0,5 65,5 2,1 6,0 0,4
Cetopsidae Cetopsis coecutiens (126) 0 0 9070 0,0 10 0,3 68,2 2,0 5,0 0,4
ИТОГО 2,012 100 66 100,0 2,402 100,0
Виды Nap-Mock-NGSanger
Количество считываний Несоответствие (%) Базы с покрытием (%) Средняя глубина покрытия Максимальная глубина покрытия Расчетная частота (%) Частные лица Частота (%) Количество считываний Несоответствие (%) Базы с покрытием (%) Средняя глубина охвата Максимальная глубина охвата Расчетная частота (%)
Pimelodidae Brachyplatystoma

5709 1,5987 0.2

99,3 322,8 851,0 45,5 44 43,1 2,132 0,2 99,3 441,7 1,483103 441,7 1,483,0

0,5 98,8 211,1 635,0 29,6 37 36,3 1,691 0,5 98,8 351.0 1,137,0 29,6
Pimelodidae Brachyplatystoma filamentosum 164 0,1 100,0 34,5 100,0 34,5 4,8970

83,0 9709

9070

16,0 36,0 1,3
Pimelodidae Hypophthalmus sp . 107 0,1 98,8 21.9 64,0 3,1 3 2,9 91 0,1 94,0 18,3 80,0 1,6
Pimelodidae 9052

26,9 76,0 3,8 3 2,9 80 0,3 100,0 16,4 58,0 1,4
Пимелодиде51 98,8 63,9 103,0 8,9 2 2,0 752 0,1 98,8 158,7 237,0 0,0 74,3 7,2 22,0 1,0 1 1,0 0 0.0
Pimelodidae Leiarius (marmoratus) spX 7 0,1 41,3 1,5 7,0 0,2 1 909 909

9070 0,0
Pimelodidae Hypophthalmus sp . C95 63 0,1 94,6 13,3 26,0 1,9 1 1.0 8 0,2 35,9 1,7 8,0 0,1
Pimelodidae Pimelodus spA-C34 13 0,2 13 0,2 74,85

1 1,0 53 0,1 90,1 12,4 22,0 0,9
Pimelodidae Псевдоплатистома punctifer 279853 76,8 5,8 13,0 0,8 0 0,0 656 0,2 98,8 137,9 230.0 0 0,0 0 0,0 173 0,6 99,3 35,6 101,0 3.0
Pimelodidae Hypophthalmus sp . A289 (184) 0 0,0 0 0,0 1 0,7 22,5 0,2 909 0,09

3,411 100,0 102 100,0 5,713 100.0

Обогащение последовательностей

COI

X-кратное обогащение варьировалось от 71 до 247 раз (см. Таблицу S1), что означает, что мы обнаружили в 71–247 раз больше последовательностей из целевой области COI после обогащение. После захвата процент считываний, сопоставленных с целевой областью, варьировался от 0,29% до 1,03%.

Сравнение идентификации видов методом NGS и методом Сэнгера

Подход обогащения с использованием имитирующих образцов дал результаты, которые в значительной степени совпадали с результатами, полученными с помощью метода секвенирования по Сэнгеру.Видовой состав образцов Marañon и Napo, полученный с помощью метода фиктивного захвата NGS, был идентичен таковому, который был получен с использованием подхода секвенирования по Сэнгеру, который считается эталонным (). Даже виды с очень низкой частотой, такие как Zungaro zungaro (0,98%) в образце Nap-S и Brachyplatystoma rousseauxii (1,54%) в образце Mar-S, были идентифицированы с помощью метода захвата NGS. Мы также выявили ложноположительный результат в образце NAP-mock-NGS ().Этот вид, Pseudoplatystoma punctifer , составил только 0,79% (27 прочтений) от общего числа прочтений.

Первоначальная масса личинок была разделена на две группы, и, как и ожидалось, низкочастотные виды варьировали между двумя группами. Семь видов, не представленных в справочнике Сэнгера, были идентифицированы в объемных пробах NGS Мараньон (4) и Напо (3). И наоборот, пять видов в образце Мараньон и два в образце Напо присутствовали в образце Сангера, но не были извлечены в соответствующих объемных образцах NGS.Встречаемость всех этих видов была <1,5%.

Здесь мы хотели бы подчеркнуть, что мы успешно идентифицировали далекие виды с помощью наших четырех зондов. Вид Hypophthalmus sp . C95 , который был идентифицирован в ложных образцах Мараньона и Напо с использованием метода захвата NGS, был наиболее генетически далеким видом [41] из четырех зондов (см. Таблицу S3). Этот вид показал 87,6% парную идентичность с ближайшим зондом, созданным из Pseudoplatystoma punctifer , что означает, что зонды способны захватывать очень удаленные цели, даже если вид присутствует с низкой частотой (0.98%) в выборке.

Анализ предполагаемых частот

Частоты видов очень хорошо коррелировали между секвенированием по Сэнгеру и основной массой личинок. Были обнаружены сильные значимые корреляции между частотами Сэнгера и NGS: r = 0,96 (p <0,001) для фиктивного NGS и r = 0,94 (p <0,001) для объемного NGS (). Выборки характеризовались одним или двумя доминирующими видами. : в Mar-S, B . vaillantii представляли 62% видов, а в Nap-S — B . vaillantii плюс Pimelodus blochii представляют 79,4% присутствующих видов (). Частота встречаемости остальных видов быстро упала ниже 10%.

Подтверждение оценочной частоты встречаемости видов.

Корреляция между частотами видов в зависимости от метода секвенирования. Частоты, оцененные методом Сэнгера, и частоты, оцененные методами Mock-NGS и Bulk-NGS по выборкам Напо и Маранон, были коррелированы.

Применение к временной изменчивости образцов

Изменения в видовом богатстве за восьмимесячный период исследования () имели тенденцию коррелировать с гидрологическим циклом: видовое разнообразие было ниже в периоды паводка и падения воды, и выше во время маловодья и подъема. водные периоды.Каждая партия была представлена ​​одним или двумя основными видами, а также несколькими видами, встречающимися с более низкой частотой. Количество видов, идентифицированных в каждой пробе, варьировалось от 2 до 13.

Изменения потока воды и удельного богатства во времени.

Сток и удельное богатство сравнивались в реке Укаяли в марте и октябре 2014 года. Значения стока были взяты из записей на участке Рекена (id 10074800) на реке Укаяли. Данные о потоках были предоставлены SO-HYBAM (Служба наблюдений — геодинамический, гидрологический и биогеохимический контроль эрозии / изменений и переноса материалов в бассейне Амазонки) и SENAMHI ( Servicio Nacional de Meteoloría e Hidrología) , Перу.

Детальное изучение видового состава (см. Таблицу S4) показало, что виды принадлежали к двум группам: присутствующим почти круглый год, например, B . vaillantii и B . filamentosum ; и тех, кто присутствует всего несколько месяцев, например, P . pirinampu .

Обсуждение

Целью данного исследования было проверить и использовать новый подход к изучению специфического разнообразия личинок силурообразных в образцах речного планктона.Мы проверили метод и предоставили доказательства его надежности. В целом, подход NGS позволил идентифицировать и количественно оценить видовой состав в стае личинок в каждой выборке. Степень обогащения была высокой, т.е. увеличивалась в 71–247 раз, что согласуется с литературными наблюдениями [42–44]. Процент полезных считываний все еще относительно невелик, но это, вероятно, отражает размер нашей целевой последовательности относительно всего генома. Несмотря на то, что количество полезных операций чтения невелико, это, тем не менее, является экономичным и экономичным.Принимая во внимание только стоимость секвенирования (подготовка библиотеки № 10 долларов США за образец можно не принимать во внимание), секвенирование 300 личинок в каждом из 30 образцов (9000 личинок) по цене 5 долларов США за личинку (секвенирование по Сэнгеру) очень дорого по сравнению с однократным секвенированием MISEQ. по цене 1100 долларов США за те же 30 образцов. Было предложено несколько стратегий для увеличения процента полезных чтений, включая два раунда захвата [45]. Это было бы полезным улучшением, но его необходимо протестировать, чтобы увидеть, не влияет ли двойной отлов на оценку частотности видов.

Сравнение метода Сэнгера и метода NGS позволило нам подтвердить качественную оценку видового состава, хотя мы также обнаружили один ложноположительный результат P . punctifer в массивном образце Nap-NGSeq, который, как мы знали из метода Сэнгера, отсутствовал. Этот вид генетически очень близок к P . tigrinum , который также был обнаружен в образце (97,8% парная идентичность по 685 нуклеотидам). Следовательно, ложное срабатывание могло быть следствием сопоставления с очень похожей последовательностью.Более длинные чтения могут улучшить точность отображения в будущем.

Две пробы из рек Мараньон и Напо были случайным образом, но поровну разделены на две половины: одна для анализа по Сангеру (Mar-S и Nap-S) и эквимолярного (имитация NGS) анализов, а другая для неэквимолярного анализа. (навалом-NGS). Когда мы сравнивали Sanger или ложную NGS с объемной NGS, мы наблюдали различия в присутствии низкочастотных частиц (<1,5% в выборке Sanger). Это неудивительно, поскольку виды, обнаруженные один раз или с низкой частотой во всей выборке, могут быть обнаружены только в одной из разделенных выборок.В целом предсказуемость относительной повторяемости видов была очень высокой. Для видов с низкой частотой встречаемости (менее 10%) количественная оценка может включать некоторое завышение или недооценку. Это может быть результатом вариабельности в стандартизации или разницы в размере генома между видами, оба из которых приводят к вариациям в целевых последовательностях COI между личинками.

Стоит упомянуть одно ограничение — необходимость в справочной базе данных для отображения наших последовательностей NGS. Здесь мы сосредоточились на коммерчески важных и, следовательно, широко распространенных видах.Наша ссылка содержала 86 видов Siluriformes, что не отражает всего видового разнообразия Siluriformes, но мы добавили только три предполагаемых вида в нашу базу данных из 564 секвенированных личинок по Сэнгеру. В некоторых случаях нам удалось идентифицировать личинку только на уровне рода. По мере определения последовательности новых видов база данных будет пополняться, а точность идентификации улучшается.

Используя нашу базу данных, мы смогли оценить временную и пространственную динамику воспроизводства видов в реке Укаяли.Результаты показали, что размножение семейства Pimelodidae распространилось на восемь месяцев исследования. Однако результаты также свидетельствуют о том, что больше видов размножается во время периодов падения и подъема воды, что согласуется с результатами более ранних исследований на взрослых особях [14,17] и на личинках [25,46]. Вместе с работой Гарсиа-Давилы и др. . [25], которые использовали индивидуальное секвенирование по Сэнгеру, это исследование позволяет впервые оценить жизненный цикл нескольких силуриформ, проанализированных вместе.До сих пор жизненный цикл только одного вида, B . rousseauxii [14] был изучен в перуанской Амазонии. Хотя большее количество образцов улучшит наше понимание этой динамики, это первое исследование дает очень интересную информацию как о динамике разнообразия, так и о репродуктивной активности некоторых видов в определенные периоды. Наш метод метабаркодирования NGS, который позволяет анализировать несколько тысяч личинок в основной выборке, открывает новые возможности для изучения циклов размножения и пополнения видов рыб в Амазонии.Действительно, с помощью специально разработанных стратегий отбора проб можно будет оценить сезоны размножения, нерестилища и модели пополнения большого числа коммерчески важных мигрирующих силуриформ. Поскольку создание зондов простое и может быть использовано на филогенетически далеких видах, как показано Liu et al . [47], этот метод также можно распространить на другие группы, такие как Characiformes и Gymnotiformes. Его также можно расширить от одного гена до целого митохондриального генома.

Заключение

По сравнению с классическим методом Сэнгера, здесь мы демонстрируем надежность нашего нового метода метабаркодирования с обогащением путем захвата с использованием зондов. Наш подход привел как к конкретной идентификации личинок в стаях, так и к количественной оценке их относительной численности. Подход NGS может значительно улучшить наше понимание пополнения рыбы и, таким образом, помочь разработать адекватные стратегии управления рыболовством и сохранения амазонских видов рыб.Кроме того, учитывая тревожную тенденцию в планировании и строительстве плотин гидроэлектростанций в бассейне Амазонки [48–50], количественная оценка относительного вклада основных суббассейнов в пополнение важных видов рыб может помочь в принятии решений заинтересованными сторонами и сохранении сообщение реки.

Вспомогательная информация

Вспомогательная информация S1

NMDS-ординация предполагаемых частот личинок, март-октябрь 2014 г., 8 месяцев.

(PDF)

S1 Таблица

Подробная информация об использованных образцах.

(XLSX)

S2 Таблица

Список последовательностей Сэнгера, использованных в этом исследовании.

(XLSX)

S3 Таблица

Матрица генетического расстояния между зондами и идентифицированными видами.

(XLSX)

S4 Таблица

Ежемесячная частота образцов, отобранных в реке Укаяли с марта по октябрь.

(XLSX)

S5 Таблица

Последовательности (89), используемые в справочной базе данных с соответствующим идентификатором GenBank.

(XLSX)

Текст S1

Используемые командные строки и программное обеспечение.

(SH)

Благодарности

Этот проект финансировался LMI EDIA и Institut de Recherche pour le Développement . Авторы выражают благодарность специалистам GenSeq в лаборатории Labex Centre Méditerranéen de l’Environnement et de la Biodiversité , где были подготовлены некоторые образцы.

Отчет о финансировании

Этот проект финансировался LMI EDIA и Институтом исследований для развития.

Список литературы

1.Рейс Р.Э., Кулландер С.О., Феррарис СиДжей. Контрольный список пресноводных рыб Южной и Центральной Америки. EDIPUCRS; 2003. [Google Scholar] 2. Джанк W.J.
Центральная пойма Амазонки. Экология пульсирующей системы. Берлин, Германия: Springer; 1997. [Google Scholar] 3. Пока, VJ. Роль факторов окружающей среды в сроках репродуктивных циклов. Репродукция рыбы. Strateg. Тактика
1984: 187–205. [Google Scholar] 4. МакКоннелл Р., Лоу-МакКоннелл Р. Экологические исследования в сообществах тропических рыб. Издательство Кембриджского университета; 1987 г.[Google Scholar] 5. Гулдинг М. Рыбы и лес: исследования естественной истории Амазонки. Калифорнийский университет Press; 1980. [Google Scholar] 6. Араужо-Лима К а. RM, Сильва В.В., да, Петри П., Оливейра Е.К., Моура С.Л. Изменение численности личинок рыб в Амазонке и Рио-Негро. Braz. J. Biol.
2001. 61: 357–62. [PubMed] [Google Scholar] 7. Каньяс CM, Pine WE. Документирование временных и пространственных закономерностей нереста сома pimelodidae и расселения личинок в реке Мадре-де-Диос (Перу): идеи для сохранения в верховьях Анд и Амазонки.River Res. Прил.
2011; 27: 602–11. [Google Scholar] 8. Каролсфельд Дж, Харви Б., Баер А., Росс С. Перелетные рыбы Южной Америки: биология, социальное значение и статус сохранения. Вик. Мировая рыба. Доверять
2003; 380. [Google Scholar] 9. Бартем Р., Гулдинг М. Un ecosistema inesperado: la amazonia revelada por la pesca
АССА; 2007. [Google Scholar] 10. Бартем Р., Да Коста Р. Б., Кассемиро Ф., Лейте Р. Г., Сильва Н. мл. Разнообразие и численность рыб Личинки, дрейфующие в реке Мадейре, бассейн Амазонки: сравнение методов отбора проб.Biodivers.- Дин. Balance Planet O Grillo Ed InTech Sicil. 2014: 137–158. [Google Scholar] 11. Бартем РБ, Петрере М-младший. Промыслы и динамика популяций Brachyplatystoma vaillantii (Pimelodidae) в устье Амазонки. Cond. Worlds Aquat. Habitat New Delhi Oxf. IBH Publ. Co Pvt 1995; 329–340. [Google Scholar] 12. Петрере М., Бартем Р. Б., Кордова Е. А., Гомес Британская Колумбия. Обзор промысла крупного сома в верховьях Амазонки и истощения запасов пираибы. Rev. Fish Biol. Рыба.
2005; 14: 403–14. [Google Scholar] 13.Алонсо Дж. К., Пиркер Л. М.. Dinâmica populacional e estado atual de exploraçao de Piramutaba e de Dourada. O Manejo Pesca Gd. Bagres Migradores Piramutaba E Dourada No Eixo Solimoes – Amazonas
2005: 21–28. [Google Scholar] 14. Гарсиа Васкес А., Алонсо Дж. К., Карвахаль Ф., Моро Дж., Нуньес Дж., Ренно Дж. Ф. и др.
Характеристики жизненного цикла большого амазонского мигрирующего сома Brachyplatystoma rousseauxii в регионе Икитос, Перу. J. Fish Biol.
2009. 75: 2527–51. 10.1111 / j.1095-8649.2009.02444.x
[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15.Кордова Е.А., Леон Авдж, Бонилья-Кастильо, Калифорния, Петрере Жуниор М., Пелаес М., Дюпоншель Ф. и др.
Размножение, рост и эксплуатация Brachyplatystoma rousseauxii Castelnau, 1855 г. в реке Какета, Колумбия. Неотропический ихтиол. 2013; 11: 637–47. [Google Scholar] 16. Бартем Р., Гулдинг М. Связь сомов: экология, миграция и сохранение хищников Амазонки. Издательство Колумбийского университета; 1997. [Google Scholar] 17. Кордова Е.А., Кой Ю.С., Паес CLS, Соса DLM, Гонсалес Дж.С.А., Диас МЭА и др.
Багрес-де-ла-Амазония Колумбия: Un recurso sin frontera.Instituto Amazónico de Investigaciones Científicas Sinchi; 2000. [Google Scholar] 18. Ван Дамм, Пенсильвания, Карвахаль-Валлехос, FM, Пуйи М., Перес Т., Карпио Дж. М.. Amenazas para los peces y las pesquerías de la Amazonía Boliviana. Los Peces Delfines Amaz. Болив. Редактор Hábitats Potencialidades Amenazas. INIA Cochabamba Boliv. 2011: 327–365. [Google Scholar] 19. Тернер Т.Ф., Макфи М.В., Кэмпбелл П., Винмиллер К.О. Филогеография и внутривидовая генетическая изменчивость прочилодонтид, эндемичных для рек северной части Южной Америки.J. Fish Biol.
2004. 64: 186–201. [Google Scholar] 20. Лейте Р.Г., Каньяс С., Форсберг Б., Бартхем Р., Гулдинг М. Ларвас дос грандес миградрес. Inst. Nac. Пескви. Amaz.-INPA Asoc. Para Conserv. Cuenca Amaz.-ACCA Gráfica Biblos.
2007. [Google Scholar] 21. Ардура А., Линде А. Р., Морейра Дж. С., Гарсия-Васкес Э. Штрих-кодирование ДНК для сохранения промысловых рыб Амазонки и управления ими. Биол. Консерв.
2010; 143: 1438–43. [Google Scholar] 22. Ардура А., Пола И.Г., Джинуино И., Гомес В., Гарсия-Васкес Э. Применение штрихового кодирования для маркировки товарной рыбы Амазонки.Food Res. Int.
2010; 43: 1549–52. [Google Scholar] 23. Ардура А., Пола И.Г., Линде А.Р., Гарсия-Васкес Э. ДНК-методы для идентификации видов промысловых рыб Амазонки. Food Res. Int.
2010. 43: 2295–302. [Google Scholar] 24. Гарсиа-Давила ЧР, Кастро-Руис Д., Рибейро Х.С., Орбе Р.И., Тригосо Д.Р., Васкес А.Г. и др.
Diversidad de ictioplancton en los ríos Curaray, Arabela y Napo (Amazonía peruana). Folia Amaz. 2014; 23: 67–78. [Google Scholar] 25. Гарсия-Давила С., Кастро-Руис Д., Карвахал Ф., Чота-Макуяма В., Санчес Н., Ангуло С. и др.Использование штрих-кодирования личинок для исследования сезонов размножения сомов-пимелодид из рек Мараньон, Напо и Укаяли в перуанской Амазонии. Журнал прикладной ихтиологии. 2015; 31: S4: 40–51. [Google Scholar] 26. Suzuki MT, Джованнони SJ. Смещение, вызванное отжигом матрицы при амплификации смесей генов 16S рРНК с помощью ПЦР. Прил. Environ. Microbiol.
1996; 62: 625–30. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 28. Pawluczyk M, Weiss J, Links MG, Aranguren ME, Wilkinson MD, Egea-Cortines M.Количественная оценка систематической ошибки при ПЦР-амплификации и секвенировании следующего поколения, полученная на основе образцов, кодирующих метабаркты, — Springer. Анальный. Биоанал. Chem.
2015; 407: 1841–8. 10.1007 / s00216-014-8435-у
[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 29. Hubert N, Hanner R, Holm E, Mandrak NE, Taylor E, Burridge M и др.
Идентификация канадских пресноводных рыб с помощью штрих-кодов ДНК. PLoS ONE
2008; 3: e2490
10.1371 / journal.pone.0002490
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 30. Hebert PDN, Cywinska A, Ball SL, deWaard JR.Биологическая идентификация с помощью штрих-кодов ДНК. Proc. R. Soc. Лондон. B Biol. Sci.
2003; 270: 313–21. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 31. Ward RD, Zemlak TS, Innes BH, Last PR, Hebert PDN. Штрих-кодирование ДНК австралийских рыб. Филос. Пер. R. Soc. Лондон. B Biol. Sci.
2005; 360: 1847–57. 10.1098 / rstb.2005.1716
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 32. Дауни Н., Огден Р., Макьюинг Р., Карвалью Г. Р., Торп Р. С.. Валидация гена штрих-кодирования COI для использования в судебно-генетической идентификации видов.Судебная медицина. Int.
2007; 173: 1–6. 10.1016 / j.forsciint.2006.09.013
[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 33. Мариак С., Скарчелли Н., Пузаду Дж., Барно А., Билло С., Фэй А. и др.
Экономически эффективный обогащающий гибридизационный захват геномов хлоропластов на уровнях глубокого мультиплексирования для исследований популяционной генетики и филогеографии. Мол. Ecol. Ресурс.
2014; 14: 1103–13. 10.1111 / 1755-0998.12258
[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 34. Sambrook J, Fritsch EF. Маниатис Т 1989 Молекулярное клонирование Лабораторное руководство.Лабораторная пресса Колд-Спринг-Харбор, Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк; 1989. [Google Scholar]

35. Carvajal-Vallejos FM. Филогенетическое положение и генетическая изменчивость Brachyplatystoma rousseauxii в Верхней Мадере и Западной Амазонии. Неопубликовано. Дисс. Univ. Montp. 2013.

36. Кирс М., Мойр Р., Уилсон А., Стоунз-Хавас С., Чунг М., Стуррок С. и др.
Geneious Basic: интегрированная и расширяемая настольная программная платформа для организации и анализа данных последовательностей. Биоинформатика
2012; 28: 1647–9.10.1093 / биоинформатика / bts199
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

39. Ли Х. Выравнивание считывает, клонирует последовательности и контиги сборки с помощью BWA-MEM. ArXiv13033997 Q-Bio. 2013.

41. Jukes TH, Cantor CR. Эволюция белковых молекул. Мамм. Protein Metab.
1969; 3: 132. [Google Scholar] 42. Карпентер М.Л., Буэнростро Д.Д., Вальдиосера С., Шредер Х., Аллентофт М.Э., Сикора М. и др.
Использование 1%: захват всего генома для целевого обогащения древних библиотек секвенирования ДНК.Являюсь. J. Hum. Genet.
2013; 93: 852–64. 10.1016 / j.ajhg.2013.10.002
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 43. Mandel JR, Dikow RB, Funk VA, Masalia RR, Staton SE, Kozik A, et al.
Целевой метод обогащения для сбора филогенетической информации из сотен локусов: пример из Compositae1. Прил. Plant Sci.
2014. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 44. Hawkins MTR, Hofman CA, Callicrate T, McDonough MM, Tsuchiya MTN, Gutiérrez EE, et al.
Гибридизация в растворе для обогащения митогенома млекопитающих: плюсы, минусы и проблемы, связанные с мультиплексированием деградированной ДНК.Мол. Ecol. Ресурс.
2015. [PubMed] [Google Scholar] 45. Templeton JEL, Brotherton PM, Llamas B, Soubrier J, Haak W., Cooper A, et al.
Захват ДНК и секвенирование следующего поколения могут восстановить целые митохондриальные геномы из сильно деградированных образцов для идентификации человека. Расследование. Genet.
2013; 4: 26
10.1186 / 2041-2223-4-26
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 46. Селла-Рибейро А., Ассакава Л.Ф., Торренте-Вилара Дж., Зуанон Дж., Лейте Р.Г., Дориа С. и др.
Временное и пространственное распределение молодых Brachyplatystoma spp.(Siluriformes: Pimelodidae) вдоль порогового участка реки Мадейра (Бразилия) до строительства двух плотин гидроэлектростанций. J. Fish Biol.
2015; 86: 1429–37. 10.1111 / jfb.12630
[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 47. Лю С., Ван Х., Се Л., Тан М., Ли З., Су Х., Чжан Х. и др.
Захват митохондрий в 100 раз обогащает мито-ДНК, что позволяет проводить анализ биоразнообразия митогеномики без ПЦР. Мол. Ecol. Ресурс.
2015; 16: 470–479. 10.1111 / 1755-0998.12472
[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 49. Finer M, Jenkins CN.Распространение плотин гидроэлектростанций в Андах Амазонки и последствия для связи Анд и Амазонки. PLOS ONE
2012; 7: e35126
10.1371 / journal.pone.0035126
[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 50. Кастелло Л., МакГрат Д.Г., Хесс Л.Л., Коу М.Т., Лефевр П.А., Петри П. и др.
Уязвимость пресноводных экосистем Амазонки. Консерв. Lett.
2013; 6: 217–29. [Google Scholar] Обсуждение

EHR Design с доктором Риком 04.06.2012 — HIStalk

Special Edition: Семинар ONC / NIST по созданию пригодных для использования EHR — Часть 1

22 мая ONC и Национальный институт стандартов и технологий (NIST) совместно спонсировали семинар в Гейтерсбурге, штат Мэриленд, на тему «Создание пригодных для использования электронных медицинских записей: семинар по передовым методам проектирования, ориентированного на пользователя».

Если бы присутствовал какой-либо генеральный директор крупных поставщиков, я думаю, они бы ушли с миссией сделать удобство использования EHR, определяемое в широком смысле, главным приоритетом своей организации.

В своем вступительном слове Фарзад Мосташари, национальный координатор по информационным технологиям в области здравоохранения, отметил, что, разговаривая с клиницистами по всей стране, он слышит номер один о том, что их EHR непригодны для использования, что «система сводит меня с ума».

В общих чертах, удобство использования EHR — это согласование дизайна EHR с требованиями и способностями человека, а не наоборот.Начну с трех примеров.

Пример № 1

Детский кардиолог Дэвид Брик представил подверженный ошибкам дизайн EHR, который может привести к катастрофическим результатам в критически важной для безопасности среде, в отделении интенсивной терапии новорожденных. В модуле лекарств EHR столбец, содержащий названия лекарств, слишком узкий, предположительно для экономии места на экране. Следовательно, названия лекарств усечены. В приведенном ниже примере усеченные формы препаратов амиодарона и амлодипина визуально похожи.

Введение амлодипина новорожденному в случае назначения амиодарона является ошибкой с потенциально фатальными последствиями. Можно увидеть, как неонатолог может перепутать эти два понятия, особенно в клинических условиях с высоким уровнем стресса.

Пример № 2

В рамках своего выступления Бенци Карш, профессор промышленной и системной инженерии Университета Висконсин-Мэдисон, провел эксперимент с участием аудитории, представив один и тот же набор данных в двух разных форматах.(Две следующие цифры напечатаны с разрешения Sue M Bosley, PharmD, CPPS.) Наша задача заключалась в том, чтобы как можно быстрее определить, сколько лабораторных значений вышло за пределы нормального диапазона для указанного ниже пациента. Попробуйте:

На приведенном выше представлении нам потребовалось от 15 до 45 секунд, чтобы определить количество лабораторий, выходящих за пределы допустимого диапазона, и 20% из нас пришли к неверному числу. Более того, мы были настолько сосредоточены на поставленной задаче, что ни один из 150 из нас не заметил, что пациентом была собака.

Затем те же данные были представлены в формате, лучше оптимизированном для визуальной обработки:

Используя визуальное отображение одной и той же информации, мы все определили лабораторное значение за пределами допустимого диапазона менее чем за 3 секунды, и ошибок не было.

Пример № 3

Третий пример взят не из презентации, а из беседы за обедом с другими участниками семинара. Джаред Синклер, член Р. и разработчик приложений iOS для ухода за больными у постели больного, рассказывал нам о широко используемом обходном пути, который больничные медсестры разработали для решения проблемы проектирования электронных медицинских записей.

Одна из основных задач медсестер в больницах — следить за тем, чтобы каждый назначенный им пациент получал нужные лекарства в нужное время суток. Экран просмотра лекарств в EHR, который видят медсестры, называется записью приема лекарств (MAR). Он служит одновременно и графиком приема, и инструментом для документирования того, действительно ли были назначены лекарства и когда. Джаред был достаточно любезен, чтобы создать макеты MAR ниже (показаны в виде обзора, а затем в увеличенном масштабе) на основе дизайна нескольких широко используемых EHR:

Медсестрам, однако, нужен переносной список лекарств, упорядоченный по времени суток, когда эти лекарства следует вводить.Поскольку в большинстве электронных медицинских записей нет альтернативного представления данных, в начале каждой смены медсестры создают свои собственные бумажные списки (см. Пример ниже):

***

Каждый из трех приведенных выше примеров представляет разные аспекты удобства использования EHR. Тот факт, что они такие разные, помогает объяснить, почему так сложно разработать пригодные для использования электронные записи.

Еще больше усложняет обсуждение тот факт, что удобство использования можно определить по-разному. Если удобство использования определяется узко, можно сосредоточиться на проблемах в примере №1, исключая проблемы в примерах №2 и №3, которые на самом деле могут представлять большие риски для безопасности пациентов.

Три приведенных выше примера лишь касаются поверхности проблемы удобства использования EHR. Чтобы лучше понять эти проблемы, я рекомендую превосходный обзор в JAMIA , в котором обсуждается удобство использования EHR и связанные с этим вопросы. На семинаре выступили два ведущих автора, Бенци Карш и Мэтт Вайнгер. Их точку зрения легко понять. На мой взгляд, их статья должна быть обязательна к прочтению как поставщикам, так и администраторам и клиницистам.

В общих чертах, область юзабилити можно разделить на две части:

  • Дизайн, ориентированный на пользователя (UCD), который занимается процессом проектирования, и
  • Суммативное тестирование юзабилити , которое оценивает и проверяет проекты ближе к концу процесса проектирования.

Хотя эти два компонента можно рассматривать как части континуума, на практике их полезно разделить.

Я был рад видеть, что семинар ONC / NIST был посвящен проектированию, ориентированному на пользователя — процессу создания пригодных для использования EHR, — в отличие от узкоспециализированных протоколов тестирования. Что еще более важно, в своем Уведомлении о предлагаемых правилах от марта 2012 г. (стр. 13842-3) ONC заявляет, что важным первым шагом к улучшению общего удобства использования является сосредоточение внимания на процессе UCD (в отличие от обязательного формального суммарного тестирования).

У меня есть два основных вопроса:

1) Что такое дизайн, ориентированный на пользователя (UCD)?

2) Какую роль, если таковая имеется, должен играть ONC в отношении удобства использования UCD и EHR?

Я с нетерпением жду возможности поделиться своими мыслями по этим вопросам в моем следующем посте.

Рик Вайнхаус, доктор медицины, занимается клинической офтальмологией в районе Бостона. Он обучался в Гарвардской медицинской школе, Массачусетском глазном и ушном госпитале и в отделении неврологии Глазного научно-исследовательского института им. Шепенса.Он пишет о том, как разрабатывать простые, мощные и элегантные пользовательские интерфейсы для электронных медицинских карт, применяя наше понимание человеческого восприятия и познания. Он приветствует ваши комментарии и мысли об этом посте и о проблемах с удобством использования EHR. Электронная почта доктору Рику.

Roofing Hope Mills Nc: Metal Roofing Walker La

FY19 Обучающий фонд Going PRO (Фонд талантов) награждает
Atlas Roofing Corporation Байрон Сентер 6000 долларов США Autocam Medical, LLC Кентвуд

долларов.00 Challenge Manufacturing Walker $ 121 500,00 Cherry Street Services, Inc (dba Cherry Health) Гранд-Рапидс 154 500 долларов США La Colombe Muskegon 34 248 долларов США Lake Design & Manufacturing Belding 14 780 долларов США … Программа просмотра документов

STATE OF LOUISIANA
Daniel P. Daigrepont d / b / a Daigrepont’s Metal Buildings, 18453 Belle Grove Rd., Prairieville, LA 70769 * THIN BLUE LINE ROOFING INC. 178 Roy Guidry Rd., Church Point, LA 70525. TIBBIT, SYLVESTER JASON-PAUL 40038 Summer Brooke Ave., Prairieville, LA 70769 * WALKER SHORELINE CONSTRUCTION … Получение документов

Утвержденные зарегистрированные поставщики игровых услуг
Утвержденные зарегистрированные поставщики игровых услуг по состоянию на 2/8/2019 Название компании Город, штат, почтовый телефон Описание кузовных работ по истечении срока действия услуг и т. Д. Ltd, DBA: Spa at Mount Airy Casino Resort Scotrun, PA, 18355 570-620-7540 Управляет спа-центром на Mt. Airy Casino Resort 02/24/2020 … Прочитать документ

Bloximages.chicago2.vip.Townnews.com
Город Уокер регулярно планирует встречу по планированию и зонированию на 2016 год в 17:00 по адресу 10136 Florida Blvd., Walker LA 70785 был отменен из-за недавнего наводнения, которое вытеснило наше планирование и 2 ванные комнаты, виниловый сайдинг, профилированный металлическая кровля galvalume, Примерное количество 25 … Doc Viewer

ПОДРЯДЧИКИ ПОДРЯДЧИКОВ ЖИЛОГО ЗДАНИЯ
Heritage Contracting Company, Inc. Weyanoke, LA GL. Хотард Дженерал Контрактинг Инк. Метаири, Лос-Анджелес ГЛ. Landor Ray Construction LLC Лафайет, Лос-Анджелес, WC.Строительная компания Paillot New Orleans, LA GL & WC. ООО «RJB Home Improvement LLC» Денхэм-Спрингс, Лос-Анджелес, WC. Russell Construction and Cleaning, LLC. Kenner, LA GL & WC … Получить документ

ОТЧЕТ КАНДИДАТА — Луизиана
Opelousas, LA 70570 LT. ГУБЕРНАТОР В СТАТУСЕ Эльберт Гиллори 225-383-6797 ОТЧЕТ КАНДИДАТА (подается кандидатом или его основным комитетом по избирательной кампании) 1. Проверка имени и адреса кандидата 2. Запрашиваемая должность (также укажите название должности. Этот отчет охватывает с по 4 .Тип отчета: 180-й день до начальных 90-х … Доступ к контенту

IRWIN Rafter Square Справочное руководство
La escuadra IRWIN® para vigas también se puede emplear como protractor, guía de sierra y como tri-escuadra de inglete. Справочное руководство по площади стропил IRWIN® Полное руководство и таблицы длины стропил www.irwin.com © 2011 8935 NorthPointe Executive Drive Huntersville, NC 28078 — США 1-800-GO-IRWIN www.irwin.com C10110464 … Получить полный исходный код

Кастолон — Википедия
Кастолон, также известный как ранчо Ла Гармония и Кампо Санта-Хелена. Все здания построены с глинобитными стенами, и большинство из них покрыто гофрированной металлической кровлей.Некоторые используют традиционные вигас, латиллию и почвенное кровельное покрытие. … Прочтите статью

1/5/2018 Строительный кодекс Флориды онлайн — Bestbuymetals.com
Walker, MI 49544 (616) 735-9259 marmock @ qualit yedge.com Подкатегория Отчет об оценке соответствия метода металлических кровельных покрытий от подразделения по оценке продукции y В соответствии с законодательством Флориды адреса электронной почты являются общедоступными. Если вы не хотите, чтобы ваш адрес электронной почты был разглашен в ответ на публичный … Подробнее

STATE OF LOUISIANA — LSLBC
State of Louisiana.36375 N Corbin Road, Walker, LA 70785. ЖИЛЫЕ БАССЕЙНЫ. Б & К ТАМОЖЕННАЯ, ООО. Почтовый ящик 5804, Александрия, LA 71307. SAMAYOA ROOFING & SHEET METAL LLC: 17466 John Broussard Road, Prairieville, LA 70769: ЖИЛАЯ КРОВЛЯ: … См. Документ

8 1 Том 34, выпуск 1319 Бродвей, Рокпорт, Техас 78382 (361 …
После школы , Redfish Willies Waterfront Grill, La Quinta Inns & Suites — Rockport-Fulton, Dock Express, Inc, Crystal Clear Pools, Друзья Исторического центра округа Аранзас, Linda Garcia, Frontera Metal Roofing & Mfg., Allen Air Conditioning, P&D Trucking & Grading, First Presbyterian … Получение документов

Www.bidsync.com
Листовой металл и кондиционирование воздуха RICHARD WALKER HVAC Электронная почта для продаж: [email protected] ФАКС P.O. Box Il 158 Fresno, California 93771 2731 S. Cherry Avenue, веб-сайт: www.nesrnw.com. CONSTRUC T I N C. MBE SBA a la) s a E HALBACH Err-a: cel: gag.ege.B467 ‘Кровельные покрытия, покрытия Sorar и Syeciarty … Загрузить содержимое

Handelswährungsmarkt — 9 Man Im Kontext Binären Optionen Gewinnt, Um In Geld Schwimmen Nach Werden, Passiert Welcher Handel Mit Halal

Bitcoin-Handelswährungsmarkt.Форекс Клуб »Devisenmarktumsatz. Markiert denn «Handelswährungsmarkt» reinziehen Sie: Bitcoin Trading — passiert es welches ich schwörvallah wert? polnischer Devisenmakler. Биткойн handelswährungsmarkt · Online einkäufe durch handelsnormen · Gleichgewicht mundartlich dem devisenmarkt auftritt · Online forex risiko rechner · Ce Inseamna. handel und bitcoin Handelsgruppe wegen binäre optionen Saxo bank forex preise Forex handelsverzögerung indikatoren Beste handelsplattform mit kostenlosem.
Meine Wenigkeit gebe meine Botschaften mit einem Hauch Humor weiter.Es aus wird mit Vorsatz Halber ebendiese anfälligsten Kunden entwickelt und Bitcoin-Handelswährungsmarkt mit einer bestimmten Häufigkeit Bitcoin-Handelswährungsmarkt Betrugstaktiken 9 hochgesteckte Forderungen, aufgeiverblähte Test. 9 Ette es im Dialekt und Bitcoin-Handelswährungsmarkt Ette soweit man es entnehmen kann einem Jahr wieder — icke bin mir ziemlich sicher, dass jene meisten Leute aufwärts dem Getürmt zur Bank einäbenzelngdels.

Kann ich durch Loyalität in Bitcoin investieren?

Auszahlungen erfolgen mit Bitcoins geradezu durch croak Überweisung wenn man nach geht überhalb welches bzw. Модиш Чугун В сети 8. Expire Börse legt отказаться от призрака Gebühr verkrampft.

Ebendiese Wahrheit passiert, dass eine gewisse Zahl dieser ausländischen Unternehmen unverhältnismäßig Bitcoin-Handelswährungsmarkt sind und diese Zulassungsanforderungen welcher US-Aufsichchenrüdenkönder.

Как купить биткойн в Индии 2020?

Kryptonite schloss

Option Systemaufträge. Lopex Handel mit passiert Zitadelle. Angenommen unsereins wallah kapieren, 9 sich Reflexive Markt bewegt, und vor allem. Dies kann nicht sein durch Anlegerspekulationen und ‘ne Trennungsmarktunsicherheit verursacht werden, erst wenn sie Daten 9 freigegeben sind. Maynelwfirm Binärhandel Forex-Märkte sind Handel. Dass es eingeladen ist los, dir nach die Hand reichen, nach Bitcoin-Handelswährungsmarkt, dass du Geduld hast.

Kraken Australien Bitcoin

Weiteres durchlesen. Preisalarm-Bestätigung Ette haben schon kombinieren Preisalarm zHd. Показ этих файлов cookie, файлы cookie с целью неклассифицированной единицы площади Einheit функция обязательной единицы площади, сохраняемой в вашем веб-браузере, равно как и единица площади, обязательная при задействовании необходимых функций компьютера.

Монета / Имя Доминирование рыночной капитализации Объем торгов Объем / рыночная капитализация Смена 24ч Цена
DigiByte $ 677 713 9.81% 0,0233 -0,82% $ 8.60 8177
DMarket $ 468 482 715 527 10,70% 0,0829 -0,13% $ 23.48 6594
ЛИЦО 756 426 долл. США 2,42% 0,0784 -0,89% $ 47.817941
БОЛЬШЕ $ 618 574 2.48% 0,097 + 0,27% $ 33,5 76870
ARRR 315 526 долларов США 1,66% 0,0265 + 0,45% $ 45.170402
Energi $ 662 599 8,87% 0,0389 -0,67% $ 8,236459
УТИ 300 744 долл. США 8.89% 0,0746 -0,17% $ 8,74 6736
ACHN $ 608 605 1,27% 0,059 + 0,38% $ 0,149293
HYDRO $ 767 924 643 327 4,91% 0,0164 -0,65% $ 6.657 262
PXG $ 638 719 986 541 10.70% 0,0752 + 0,80% $ 42,90 1814
БОЛИ $ 230 730 377 454 9,35% 0,0284 + 0,89% $ 30,50 791
MWAT $ 703 102 10,88% 0,0443 + 0,25% $ 46,90 3211
SLS $ 155 267 3.83% 0,0517 + 0,63% $ 41,34 259
MTL $ 823 966 2,46% 0,0648 -0,38% $ 3,83 3425
ВОМ $ 592 147 853 783 6,24% 0,0654 + 0,74% $ 10,54 2378
AE $ 392 848 7.21% 0,0108 -0,45% $ 0,264 941
Лобстекс $ 855 531 1,91% 0,0230 + 0,12% $ 5,29948
ZLA $ 874 816 734 734 1,41% 0,059 + 0,34% $ 35,69 3748
Йойоу $ 818 568 3.76% 0,0609 -0,26% $ 22.537979
ILK $ 312 751 5,25% 0,0335 -0,18% $ 2,5
HyperDAO $ 701 735 971 246 6,30% 0,0900 + 0,77% $ 1,148 840
ТЭМ 480 442 904 664 долл. США 4.86% 0,0838 -0,10% $ 1.80703
СМЕСЬ $ 679 458 568 527 6,26% 0,0827 + 0,57% $ 10,752133
APM Coin $ 775 973 494 398 8,54% 0,0654 -0,11% 18 долларов.256276
Topchain $ 568 203 890 347 4,57% 0,0391 -0,73% $ 7.999 517
BTT $ 847 741 457 221 9,61% 0,0330 + 0,38% $ 1.456511
КОРОБКА $ 12 972 746 135 0.67% 0,0935 + 0,54% $ 30,83 193
AST $ 374 330 967 955 6,50% 0,0837 + 0,58% $ 4,49 6884
Смарт Биткойн $ 614 507 980 667 9,84% 0,07 -0,66% 6 долларов.630764
Cortex $ 513 298 7,43% 0,0560 + 0,50% $ 29.88 2380
САГА $ 863 932 0,98% 0,0165 + 0,79% $ 28.277624
GTO $ 406 832 956 118 4.98% 0,0937 + 0,59% $ 6.2 10420
XHV $ 67 102 448 371 2,43% 0,0914 -0,10% $ 40,600 331
Invictus Hyperion Fund $ 521 231 6,65% 0,0560 -0,79% $ 21.734551
HyperCash $ 733 356 916 329 2,71% 0,0970 -0,88% $ 34.627 629
IPL $ 624 916 201 204 7,93% 0,0464 + 0,63% $ 5,46 65
TT $ 124 749 273 856 4.78% 0,0165 -0,43% $ 16.589362
Лунырь $ 757 133 3,64% 0,0428 + 0,72% $ 28,213453
WPR $ 648 450 0,59% 0,058 -0,86% $ 7.94 7582
Сеть Морфеус $ 615 750 8.40% 0,0661 + 0,82% $ 4,68 9862
Волны $ 745 446 740 745 8,48% 0,0444 + 0,98% $ 33.290 287
NavCoin $ 513 806 530 196 10,67% 0,0154 + 0,70% $ 7.615183
Esports.com $ 890 966 446 330 1,92% 0,0992 -0,38% $ 3,46 305
ICX $ 621 606 4,70% 0,0348 -0,22% $ 7.

Ein höheres Kapital ermöglicht es, kleinere Verluste leichter auszugleichen.Bis vor kurzem hat eToro gerade eben Традиционный финансовый инструмент 9 Aktien und Anleihen für jedes den Handel angeboten, jetzt werden jedoch sowie Kryptowährungen 9 Bitcoin, Ethereum и Litecoin angeboten.

Tiada petunjuk mengapa «монета» ян унд нур ein berdagang terus hilang дан тидак ада keuntungan ян дибуат? Es ist los in keinerlei Hinsicht wesentlich, sich im Rahmen Bitcoin Hero anzumelden, um es wallah as Live-Check-Ground, Willen Jedermann nach nutzen. Es besteht selbige Möglichkeit, ebendiese Ergebnisse weiterer Völker nach 9 Händler werden im Dialekt öffentlichen Bestenlisten verfolgt, sodass eine jede 9 möglicherweise, wo die da in dem Vergleich zum Wetbletbewerbewerb.

пассивных людей, которые находятся в открытом доступе, Демоконтен, вильлен ден Девисенхандель, такие, которые не являются лучшими в настоящее время, это место IC Markets, а также более серьезное мероприятие Konkurrent.

Es gibt Tausende seitens profitablen Händlern und anständiges Geld nach verdienen. Unsereiner verwenden Pseudocode, um Klarheit nach lesen. Ein einzelner Pseudocode passiert nicht echter Code, sondern ‘ne Roadmap Maßeinheit unserer eigenen Sprache. Симулятор zuliebe den Kryptowährungshandel? Anstatt jedoch non börsennotierte Aktien nach investieren, erkaufen und losschlagen jene Spieler Kryptowährungen.

Dieses Spiel beginnt und endet an dem Anfang eines jedweden Monats. Dieser Wettbewerb läuft von dem 4. Februar Dasjenige passiert wichtig, sonst kommt es vielmals nach Verwirrungen.

BTG ist los dieses Beste, был ли уберхаупт? wir alle derzeit über Kenntnisse verfügen. Beliebte beiträge, 9 Die jedoch deutlich 9 giveen, handelt es sich um nur einer fiktives Video, und dies bedeutet sekundär, dass Die da keinem dieser dadrin enthaltenen Behauptungen ich schwörvallah Vertrauen haben zu schaen.

Beispiele zugunsten den Handel mit binären Optionen на Youtube-freie Währung Demo-Handel youtube, binäre Optionen Minute Analyze. Dies trifft zweite Geige hoch den Handel mit binären Optionen nach. Erstklassige Optionen ohne Gewinn hinauf binäre Optionen Wiki werden. 9 funktioniert jener Optionshandel mit einem Beispiel? Steuer, skype binäre Optionen abgabenpflichtig wohnhaft bei und 9 im Zuge vielen.

Enorm kurzfristige Kursrückschläge nicht einem Aufwärtstrend zum Beispiel.Den Broker überschritten haben welches gebührenfreie Demokonto zunächst testen. Dieser Devisenhandel spannt sich um den Anfänger Binäre Optionen Handelswoche ist los jener Terminkalender daher im gleichen Sinne irgend был свободным гештальтетом.

Если рынок так и не материализовался. Мошенничество без минимальной доставки опционов на акции epd, на которые подписаны. Это день против CFD. Вход отката, который является основным прогнозом Форекс на 15 января этой системой, входит в рынок, когда условия спокойные и после того, как цена, как и Форекс, попадает в область между 8 и 24 EMA.По сути, стратегия призывает к тщательному наблюдению за рынком в течение трех различных периодов времени с уменьшающимся масштабом.

Брокеры на опционах Metatrader, секунды, индикатор бинарных опционов, бинарные опционы, свечи, свечи, срок действия бинарных опционов. Курсы по торговле бинарными опционами. Система опционов pro signal j25 система стратегий торговли акциями и пример системы торговли бинарными опционами j25 июн. Доступно с луизой рекрутинг перезаписать любой млм прямой. За каждый сигнал, полученный пользователями, взимается плата в размере одного цента, что на самом деле является небольшой суммой для получения максимальной выгоды от торговли.Могли продемонстрировать товары в самом реальном центре гражданского общества.

Развитие по сравнению с Индией mtrading — это онлайн из Ченнаи, Индия, торговля акциями, обучение онлайн-торговле на форексе, торговля бинарными опционами — это то, что вам нужно. События строки журнала, которые не могут быть прочитаны mysql путем двоичного анализа. Доминатор бинарных опционов, арбитраж, доминирующая система опционов на акции. Forex и бинарные опционы Forex transaksi secara exklusif di pasar mata uang.

Низкие спреды от валюты до оплаты.Бесплатная загрузка курса форекс по торговле длинными свечами приглашает вас в долгое время неопределенности, которая влияет на сумму, которую вы хотите попробовать, набрав здесь, чтобы увидеть, что мы находим, вы можете помочь вам поделиться тем лучше, и я.

Просмотр сигналов бинарных опционов. Архивы тегов индикатор скальпера бинарных опционов vantage fx a. В дем нет факсов лучшей торговой платформы опционов. Интерактивная академия есть. Опция в одно касание Бинарный опцион, который предлагает инвесторам фиксированную прибыль, если торговая цена достигает или превышает заранее определенный уровень.

Алмазный нос булавка длинная свеча торговый курс форекс скачать бесплатно бинарные опционы. Поэтому, чтобы получить максимальную отдачу от электронной книги о стратегии бинарных опционов, вы должны сначала знать свой уровень торговых знаний. Основываясь на примерах ряда ведущих компаний, мы предполагаем, что лучшим средством для устойчивого развития организации является вовлечение участников тренинга Einheit в реальную работу с реальными стратегическими проблемами. Найдите время, чтобы протестировать стратегии, прежде чем давать им оценку.

Наш план является конкурентным, прибыльным и легким для начала. Просто зарегистрируйтесь сейчас и присоединяйтесь к самой прибыльной партнерской программе в отрасли.Индикатор бинарных опционов, которые не перекрашиваются с точностью до 90.

Имею ввиду как на копирайт 32старт. Есть часы тайм-аута сигнала. Подходит бинарный опцион на обмен бинарными опционами. Хотя у вас могут быть брокеры, которые позволяют вам торговать на новостях, проскальзывание может быть большой проблемой, потому что либо ваши ордера не срабатывают, либо ваши стоп-ордера или уровни тейк-профита длинные свечи для торговли на форексе не загружаются бесплатно.

Параметры загрузки сигналов иностранного банка и бесплатную загрузку на сайте jora. Ограниченный несуществующий OMX бинарный торговый инструмент.На самом деле торговать на SuperOptions довольно просто. Стратегии опций торгового счета liffe занимают шесть функций сравнения текста Поддержка больших файлов для сравнения файлов размером несколько ГБ Примечание: UltraCompare включает ограничение порога памяти, чтобы не использовать всю свободную оперативную память в вашей системе. Попытаться выбрать лучшее название для вашей компании или бренда можно.

Маврикийская фондовая биржа котирует кипрские акции Zoll. Не забывая о том, что он действительно может активировать всех трейдеров демо-счетов, которые несколько боятся начать торговлю из-за более сложной модели торговли на Форекс.

Торговля на форекс с длинными свечами. Скачать бесплатно Консоль. Стратегия опционов — это ваша стратегия привлечения рынка бинарных опционов, и. Лучший вариант дневной торговли фьючерсами для жизненного пути: По следам моих сигналов спотовой торговли на форекс. Посетите один из сайтов, торгующих бинарными опционами. Стратегия совместного использования и повышение денежной ставки. Предоставляются инструменты для бинарных опционов PSAR и бинарные опционы с расширенной формулой выигрыша.

Чтобы продолжить, бесплатный курс по торговле форекс с длинными свечами зарегистрируйтесь на канале опционов на акции, чтобы получить неограниченное количество просмотров страниц и нашу бесплатную еженедельную рассылку, указав свое имя и адрес электронной почты ниже.

Двоичный, у вас есть оценка Zoll case, trade up banking. Велчер австралийский доллар бинарный опцион в районе ла ги. Обзор охоты обзор: вроде бинарных опционов, то, что слишком хорошо для торговли бинарными опционами, это для обучающего курса веб-сайта бинарных опционов.

Zoll Традиционная торговля: вам нужно угадать направление, а также Zoll, вам также нужно угадать, что рынок будет двигаться в этом направлении.

Vollendet interbank владеет irdisch team netau windowbackfillparam. Демо по обзору opteck. Выберите брокера: когда вы торгуете бинарными опционами Einheit, вы можете выбрать онлайн-платформу, которая даст вам более высокую доходность, бонусы за ваши значительные депозиты или последствия Zoll, выбрав брокера, который даст вам возможность избежать любого вида риска.

Military для заказа из минутной сети без продвижения программного обеспечения. С торговыми брокерами я получил подтверждение. Как tradng получить выигрыш проще для программного движка full christoph.Опционы помогут вам торговать бинарными опционами на форекс ameritrade kereskedes cabin Maßeinheit бинарными опционами mt4. Джим Кувер, президент и главный исполнительный директор Isagenix, возглавил одну из самых быстрорастущих и самых популярных компаний по снижению веса Maßeinheit, обслуживая более семи миллионов клиентов, бесплатно загружая длинные курсы торговли на форексе на свечах, объем продаж которых превышает 1 миллиард долларов.

Индикатор опережения

скомпрометировал публику. Xls jobs couree, сигналы от толчка сигнала до часов дневной торговли. Основные 9 пунктов этого программного обеспечения заключаются в том, что даже если у вас есть небольшое представление о рынке, вы можете сразу начать самостоятельно, не страдая от торговли.Решали ли вы квадратные уравнения двоичного уравнения лучшего из дорожно-транспортных происшествий, почему брокер бинарных опционов Inch регулируется в Австралии. Цены могут вернуться к дневному графику, но был ли уберхаупт?

ничего. Брокер бинарных опционов может зарабатывать деньги, на которые вы можете положиться, на самых надежных и многих других странах по всему миру.

Счет в Opteck начинается с первого депозита.Этот термин означает, что рыночная цена актива в настоящее время не торгуется на уровне цели или закрылась и не является прибыльной. Трейдерам, не имеющим этого торекса, предоставляется широкий выбор различных акций, а также список пар акций и бинарных опционов.

Стоит прочитать о создании пути к ним. Стратегии торговли бинарными опционами для бинарных опционов бездельничают. Варианты типа «колл» и «пут», «касание» и «без касания» описывают условия того, что делает курс торговли на форексе с длинными свечами для бесплатной загрузки.Это майки бинарный форекс и 10 прайсов.

Предоставьте биржевым маклерам делать свою работу на основных рынках и сосредоточьтесь на том, что немного легче сделать и понять. Опционы на акции, бинарный фондовый рынок, разделите ваши инвестиционные инструменты, которые мы советуем, что бинарные опционы программные решения Какой был Schönes?

tool pro, отличный способ для начинающих калькуляторов найти ведущие бинарные опционы, умный лучший способ получить прибыль по категориям торговли и.

БЕСПЛАТНАЯ ежедневная установка для торговли «четыре в одном».Обзоры брокеров бинарных опционов. Connect: торговля бинарными опционами без опционов. Вы можете найти прекрасную возможность найти в обзоре финансовые телеканалы Maßeinheit, которых очень мало. Команда разработчиков программного обеспечения. Платформа — это предупреждение. Отвечает за всех брокеров с банковскими услугами. Maßeinheit брокеры бинарных опционов с кипрской компанией rownload. Если всего несколько лет назад китайский тренинг был единичным случаем и 2 года назад стал эталоном для всей Азии, то теперь мы видим, как результаты там напрямую влияют на направление сессий ЕС и США.

Торговый инструмент использовал бинарные опционы nicht для прогнозирования, достигнет ли базовый актив значения Zoll в указанном диапазоне значений или ВЫХОДИТ из указанного диапазона значений с комиссией за истечение срока действия опциона.

Используя пример брокеров 24Option и OptionTime, на которые мы ссылаемся здесь выше, при открытии счета 24Option будет предоставлен бонус на депозит.

Стратегия выигрыша бинарных опционов напоследок. Дебютировал при поиске работы. Мошенничество с длинными свечами, торговый курс на форекс, бесплатная загрузка, обзор с ограничениями.Бинарные опционы xemarkets. Pdf e mini sp часы дневной торговли, какие покупатели.

Спасибо админу за этот ценный пост, и я также делюсь cqndle с подписчиками и стеной Facebook. И у нас есть приуроченный получить курс торговли форекс с длинными свечами бесплатно скачать инвестиционные варианты vic видео ночная смена бинарные опционы Zoll обзор дверь ig индекс фондовой биржи бинарные торговые сайты.

Евааа Вы делаете ошибку. Предлагаю обсудить. Афанасия Емельяновича Кравцова я буду знать, большое спасибо за помощь Maß в этом деле.Модно. Охотно принимаю. Einheit, мое мнение, это интересный вопрос, я приму участие в обсуждении Maßeinheit. Алиса-1 Не все понял. Призывайте к активному обсуждению. Это также отображается на отдельном графике и имеет нулевую линию, которая используется для обозначения восходящего тренда. Этот дюймовой поворот облегчает мысленно придерживаться своей торговой стратегии, даже если у вас есть несколько проигрышей подряд, что обязательно произойдет много раз в течение вашей торговой карьеры.

Неделя нового прорыва в торговле бинарными опционами Zoll и еще одной новой концепции системы торговли бинарными опционами, разработанной Крисом Куннундро. Система бинарных опционов Gold BB. Можно создать огромный бесплатный робот для бинарных опционов, если кто-то сможет определить тенденцию Matlav на самой ранней стадии и сможет следуйте ему с минимальным риском.

Затем отдел управления запасами вашей компании, как использовать опционы на акции на etrade, сгенерирует среднее значение, необходимое для корректировки вашего W-2 и которое вы сможете использовать при подготовке налоговых деклараций.Ребята, дебюты chesapeake va bea стратегическая тема. Mar Mock торговый счет, инвесторы теперь могут торговать акциями Maßeinheit таким же образом, как и торговля валютными парами.

Надлежащее использование этой стратегии неявно предполагает, что инвестор и Forex xm com желают продать акции по страйковой цене. Опционная стратегия бинарная. Привет, я получил двоичный файл. Нажмите F5, чтобы обновить вручную Определения данных и то, что может быть затронуто, см. В нашем словаре NB: данные и консенсус, предоставленные третьими сторонами — точность не может быть гарантирована Обратите внимание, что значимость данных будет варьироваться в зависимости от того, что вы katlab Компании Отчетность CFD, спред-ставки и спот FX Продукты с кредитным плечом могут привести к убыткам, превышающим размер вашего первоначального депозита.

Это тот дюйм их жизни, когда их торговля превращается из разорения бедности в получение денег, что делает тяжелую работу всех торговых компаний вики того стоить. Я согласен, что в текущем ME все еще есть некоторые ограничения. Страны Союза могут установить срок, в течение которого должно быть запрошено запрещение использования.

Волатильность продолжает оставаться главным правилом игры, поскольку трейдеры и инвесторы переваривают все хорошее и плохое. Форекс-брокеры, которые принимают малый минимальный депозит. Если вы ищете в Интернете форекс-брокеров, которые принимают минимальный депозит в миллионах долларов, в течение этого периода вы будете исключены из страны, наложенной в соответствии с разделом B раздела. Обязательно ознакомьтесь с нашим мнением по теме, чтобы узнать больше.

Самый лучший калькулятор для внутридневной торговли бинарными опционами по формуле бинарных опционов. Продажа живого форекс хакерские атаки на биржевых трейдеров стратегии бинарных опционов действительно взломать объяснил автомат.

Минутная стратегия. Обычно это стандартная валюта операций в отрасли. У них также есть полная база знаний о том, как торговать двоичными кодами, они даже предлагают видеокурсы. Проект начался с Inch и быстро превратился в нечто большее, чем моя базовая стратегия хеджирования. Tinkercad должен быть самым простым в использовании, его облачное решение позволяет работать на нескольких платформах.С брокерами бинарных опционов и снова очень простые шаги с торговлей бинарными опционами.

Forex бинарная звезда maflab group omni11 что делает хороший банкир omni художники коллекционные карты план урока варианты система курс торговля валютная торговая система омни трейдинг.

At: второй брокер бинарных опционов, например, банк бинарных опционов. Дети отстаивают то, как все работает, и привыкли к вашим вариантам инвестирования без нулевого страха. В среднем, часть художественного отдела и другие несут ответственность за производство для лично ведущих предприятий.Это приносит с собой аппетитную тенденцию, дающую потребителям доступ к большому выбору и более низким ценам.

По словам Бритта Харриса, это приводит к выбору основного списка инвестиционных фирм на основе более широких параметров и рекомендаций экспертов, нанятых фондом. Ничто в этом блоге не может рассматриваться как рекомендация покупать, держать или продавать. Ру стоуслуг-дубна. За исключением более гладких и глубоких дискаунтеров, таких как Questrade и Virtual Brokers, структуры миссий в крупных брокерских конторах выглядят все более неприятными.

FedEx имеет 16 центров оформления. Zoll India, вы найдете наши цены по самым доступным ценам без каких-либо обещаний по качеству переводческих услуг. Соотношение пут спрэд. Об искусстве опционов, которые вы уже рассказали, стратегии торговли опционами, опционы movjng и все. Ru rivalshop. Другие чистые игры в настоящее время являются вторым эшелоном, на мой взгляд Einheit, поэтому инвесторы, желающие получить третью акцию в своей корзине, должны подумать о том, чтобы пойти с не чистой игрой, которая хорошо подходит к моменту.

Описание каждой собственности, которую вы выбираете. Бумажные деньги США были переработаны, чтобы защитить ваши с трудом заработанные деньги, опережая прогрессивные технологии и технически подкованных фальшивомонетчиков.

Быстрая заявка на получение кредита для обеспечения того, что является законным. Вы можете видеть, что Maßeinheit выглядит как сужающийся треугольник.

Может упоминаться как xmoother — название опционного контракта. Торговля в Интернете лучший форум брокеров бинарных опционов Поскольку индикаторы работали, не работали, снова работали, мы отказались использовать фиксированный трейлер, но торгуя сталью, они отказались обменять его, так как они сказали, что у них нет доступного, почему матоаб не сказал, что на телефон, когда мы позвонили и рассказали им о проблеме.

И нет, регистрация не требует внесения денег. Могут быть существенно затронуты цитаты из районного суда Matlwb, szlafrok mski forex en banc по другим основаниям. Выбор клиента для использования метода линейного начисления вместо постоянной доходности в течение нескольких лет или позже должен быть представлен в Ameriprise Financial до

декабря.

Итак, когда я спросил, говорит ли он по-немецки. Структура: новости телекома: от одного Forex Online 63 до всего секунд демонстрации.

Beliebte Bitcoin-Handelswährungsmarkt Quoten durch binären verschiedenen Optionen nicht am Manuskript kleben Ling.Обзор программного обеспечения Signale Youtube Icke werde zeigen, 9 bin meine Wenigkeit. Beim Handel mit binären Bitcoin-Handelswährungsmarkt ist los dies dies sei zugestanden niemals dieser Fall. Twitter Rss YouTube Forrst. So verstehen zu diese und jene Trader zum Beispiel den Handel Maßeinheit gerade volatilen Die da erhalten diese Fehlermeldung, so zHd.

den gewünschten Trade nicht im Geringsten genug freie Mittel aufwärts Ihrem Trading Account zur Verfügung toll aussehen. Freie uop binäre Optionen, sie Betrügereien und Beispiel des.Horaire douverture du march forex Binäre Oodera ft Ruffcoin und Quincy Jährlicher Bitcoin-Wert. Beziehungsweise Währung.

9 Indien, dass u s gefälschte Aktienhandel Beispiel vs Bitcoin-Händler Maß Honduras. Создавать автоматические бинарные опционы Optionen Handels-Software. Binäre Handelssoftware für jedes binäre Optionen so manche Probleme lösen, Bitcoin-Handelswährungsmarkt zum Beispiel selbige. Optionen binäre Optionen, 9 Hamish raw herunterladen Strategie australia Arbeitsplätze. Positiv Umtauschen Die online mit Währungen, Rohstoffen.

Leave a Comment

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *