Как снимали сериал «Гусар» с Гариком Харламовым на ТНТ
Идея, сюжет и кастинг
Молодой ученый Митя Журавлев десять лет посвятил созданию машины времени, пока его жена Катя зарабатывала деньги и тащила на себе весь быт. Ей надоело, что Митя женат не на ней, а на машине времени, и в день, когда она решила сообщить супругу о расставании, в их доме прямиком из 1812 года оказывается Рыльский — Катин предок, русский боевой офицер, который должен был доставить секретное послание Кутузову, но вдруг оказался в Москве наших дней.
Попытка вернуть поручика обратно заканчивается поломкой изобретения, и до тех пор, пока Митя его не починит, Рыльский будет жить в квартире Журавлевых. Гусару предстоит открыть для себя телевидение, электричество, Интернет и другие прелести будущего, посмотреть, во что превратились бывшие жандармы — нынешние полицейские, удивиться понятиям чести в интерпретации современных мужей, а еще натолкнуть семью Журавлевых на размышления о том, что привело их к разладу.
Идея снять сериал о гусаре из 1812 года, который попадает в наше время, пришла в голову генеральному продюсеру Comedy Club Production Вячеславу Дусмухаметову. Продиктована она была в том числе и тем, что первой ролью Гарика Харламова в кино была роль гусара в фильме «Шекспиру и не снилось». Также Гарик появлялся в образе гусара в Comedy Woman.
«Нам показалось, что в этом есть определенный концепт. А еще мы поняли, что на развлекательном телевидении практически нет комедийной фантастики, нет удивительных, сказочных и в то же время смешных историй. Вот так все и сошлось, — рассказывает креативный продюсер и сценарист сериала Илья Полежайкин. — Съемки сезона в общей сложности заняли около года. Мы сделали небольшой перерыв на карантин, за время которого успели переосмыслить и улучшить материал, чуть-чуть отдохнуть, и вернулись к съемкам с новыми силами».
До «Гусара» Гарик Харламов играл небольшие роли в кино, появлялся в скетчах и сотнях миниатюр, а в прошлом году представил полнометражное мокьюментари о персонаже Эдуарде Суровом, которого сыграл он сам.
Но большой роли в художественном сериале у него не было.
«Это была первая большая роль Гарика, и, на мой взгляд, лучшая! “Гусар” полностью держится на нем, он – центр сюжета. Гарик все-таки эстрадный артист, а не драматический, у него нет театрального опыта, и на такой длинной дистанции приходилось нелегко. Плюс настоящий исторический костюм, плюс постиж – все это было непросто», — делится режиссер сериала Рустам Мосафир, автор драматического фэнтези «Скиф».
На съемках сериала Гусар
Кроме Харламова в главных ролях в сериале снялись молодые актеры Екатерина Ковальчук и Павел Рассомахин, которых после премьеры «Гусара», мы уверены, ждет всенародная любовь.
«Мы вообще за то, чтобы на ТНТ появлялись новые лица! Это кредо Comedy Club Production. Например, когда в эфир вышли сериалы “Интерны” и “Универ”, зрители увидели новых актеров, которых эти сериалы, по сути, открыли. О многих из них никто раньше не слышал, а в итоге они стали суперзвездами. Это здорово! Нам хочется, чтобы зрители включали телевизор и не чувствовали усталости от одних и тех же лиц на разных каналах.
Катя Ковальчук и Паша Рассомахин потрясающие актеры, и нам очень повезло практически сразу увидеть их на кастинге и понять, что вместе нам по пути», — говорит Илья Полежайкин.
Чтобы костюмчик сидел
Настоящие исторические костюмы – особая гордость создателей «Гусара». На проекте работал специальный консультант, а создавать костюмы для персонажей исторического блока помогали реконструкторы. «Да, с костюмами мы пошли по пути исторической аутентичности. Костюм Гусара был сделан из шерсти, он очень тяжелый, в нем невероятно жарко, а еще в нем не предусмотрено никаких современных приспособлений вроде карманов и ширинки. Поэтому Гарику для того, чтобы попасть на биопаузу, приходилось снимать весь костюм! И если мы снимали на натуре и было холодно – Гарику было комфортно. Но как только мы зашли в павильон с огромным количеством световой аппаратуры — стало тяжело, буквально через час съемок Гарик превращался в соленую недовольную лужицу (смеется)», — рассказывает креативный продюсер.
«Гусар»
«Мундир – это самое сложное, что было на съемках! Летом в нем было дико жарко. Он сделан из того же материала, из которого были сделаны мундиры настоящих гусар. Я вообще не представлю, как в этом можно было ходить – огромное количество разных заклепок… Из-за этого войны шли так долго!» — шутит Харламов.
Самые сложные сцены
«Гусар» — это не просто разговорная комедия, построенная на шутках и каламбурах. В ней еще и немало экшена – нечастого элемента в телевизионных комедиях.
«Во время съемок серии “Как Гусар назад в будущее хотел”, — рассказывает Илья Полежайкин, — мы снимали сцену с телегой времени. Эта телега была на собственном ходу, и ночью, под невероятным дождем, по пояс в грязи, замерзшие, мы должны были пустить её под откос с Гариком Харламовым внутри. В финале телега должна была эффектно врезаться в дерево. Гарик и Паша сильно промокли и вымотались, к тому же каждый раз что-то не получалось, то телега не едет, то едет слишком быстро, то пиротехника не срабатывает.
В общем, все усталые и злые, а Катя Ковальчук в это время ждала следующих сцен в теплом и сухом актерском вагончике. Во время очередной технической заминки Катя вышла на площадку поддержать Гарика и Пашу. Она подошла к измученным артистам и сокрушенно произнесла: “Знаете, что самое сложное в работе актера?” Парни устало спросили: “Что?” — “Просто сидеть и ничего не делать!” – ответила Катя. Мы очень сильно смеялись!»
«Сцена с телегой времени была самой сложной, соглашусь с Ильей, — продолжает Рустам Мосафир. — Шел дождь, мы снимали экшен, подвешивали Гарика. Но ему, кстати, эта ситуация, когда он висел под большим наклоном на тросике и мог в любой момент сорваться, доставляла много эмоций и актерской энергии. А еще это была очень интересная сцена, я думаю, что в кадре это видно. С точки зрения и юмора, и зрелищности – это такой аттракцион, и с точки зрения кино. Мы взяли серьезный уровень.
С одной стороны, это было тяжело. Но, с другой стороны, я уверен, что если сцена физически тяжело давалась команде, через боль, то на экране это будет выглядеть очень хорошо.
Меня скорее пугает, когда таких сцен нет!»
А сам Гарик Харламов вспоминает сцену, в которой ему как актеру пришлось столкнуться со своим страхом: «Больше всего мне запомнилась сцена, в которой наши герои, включая Гусара, падают в машине и начинают тонуть. Я впервые столкнулся с моей фобией! Я не думал, что вода в машину действительно набирается настолько быстро… В какой-то момент стало очень страшно: 4 человека в машине, я в мундире и с саблей, вся надежда на каскадеров и на людей, которые должны были быстро поднять машину из воды. Слава богу, все были профессионалами, и даже если среди них кто-то и точил на меня зуб, все прошло хорошо. Но это было страшно, ведь мы тонули в машине на самом деле. Хотя я делал вид, что мне было совершенно не страшно».
«Гусар» и забавная статистика
Один из самых верных показателей трудоемкости проекта – это цифры. «Гусара» снимали почти 100 съемочных смен, в них были задействованы 200 человек из съемочной группы и больше 2000 актеров массовых сцен, а также 420 каскадеров, пиротехников и альпинистов для трюковых сцен.
Они использовали 700 килограммов пиротехнических средств (посадки, дымы) и 2,5 тонны игрового и обстановочного реквизита, а художники поработали с 40 тоннами павильонных декораций, 1130 костюмами и 124 килограммами грима. Съемки проходили в 200 локациях, на них было установлено 169 осветительных приборов. А также за весь съемочный процесс было съедено 16 744 порции обедов!
А что из всего этого вышло – смотрите с 5 октября в 20:00 на ТНТ!
Гарик Харламов сыграл попавшего в норвежскую тюрьму бизнесмена в новом сериале «Зона комфорта»
11:23, 22.10.2020
Премьера проекта состоится сегодня на платформе Premier.
В начале октября на экраны вышел сериал «Гусар», в котором Гарик Харламов впервые сыграл главную роль.
Сегодня же 39-летний шоумен поспешил обрадовать своих поклонников и рассказал, что вечером состоится премьера другого проекта с его участием — «Зона комфорта». В сериале Харламов снова играет главную роль.
Герой Гарика Ярослав Костров, хамоватый и изворотливый владелец небольшой транспортной компании в Мурманске, по стечению обстоятельств попадает в норвежскую тюрьму, где уровень комфорта напоминает хорошие гостиницы со всеми удобствами и интернетом. Но единственное, что связывает Ярика с домом, — это окно «Скайпа», через которое ему придется как-то выпутываться из сложившихся обстоятельств, а также противостоять мафии, контролировать свой бизнес, стараться не потерять жену и воспитывать детей, которые по «скайпу» воспитываться отказываются.
«Зона комфорта» — российский комедийный сериал Михаила Шулаева, созданный в формате screenlife специально для видеосервиса PREMIER. Производство было осуществлено при помощи продюсеров компании Medium Quality Production, специализирующейся на разработке юмористического контента, а также развитии различных Youtube-шоу таких как «Внутри Лапенко», «Что было дальше?» и Big Russian Boss Show.
«Премьера на Premier! Не удивляйтесь, это мой новый сериал!!! «Зона комфорта», для тех кому мало «Гусара» ) Осторожно, этот с матом! Смотрите только на Premier !» — написал Харламов в своем микроблоге в Instagram (орфография и пунктуация автора даны без изменений. — Прим. ред.).
Кадр из сериала «Зона комфорта»
Стоит отметить, что в последнее время Харламов активно снимается в кинопроектах. В одном из недавних интервью звезда Comedy Сlub рассказал о своей работе над первым сезоном сериала «Гусар». Он признался, что после съемок в пилотной серии комедии хотел отказаться от участия в проекте, но продюсер Вячеслав Дусмухаметов смог убедить его продолжить съемки. Несмотря на трудности, когда грим нужно было накладывать три часа, а в тяжелом костюме было жарко и невозможно было сходить в туалет, Харламов доволен своим персонажем и считает, что высокие рейтинги многосерийной комедии совершенно заслуженны.
По словам Харламова, сериал зацепил его тем, что он совершенно не похож на те российские проекты, которые он видел.
Как считает Гарик, он одновременно и фантастический, и современный, в нем соединены несколько историй, которые ему нравятся. Харламов признается, что ему было сложно учить текст, из-за этого появлялись очень смешные ляпы, которые достойны отдельного фильма.
Кадр из сериала «Гусар»
Несмотря на то, что Харламов и 32-летняя актриса Кристина Асмус этим летом сообщили о своем разводе, экс-супруга поддерживает артиста. Недавно актриса поздравила бывшего мужа с премьерой «Гусара». К слову, супруги прожили вместе восемь лет, у них подрастает шестилетняя дочь Анастасия. Асмус и Харламов заявили, что мысли о расставании появлялись у них в последние годы, однако и поклонники, и хейтеры посчитали, что Гарик и Кристина расходятся из-за фильма «Текст», в котором Асмус снялась в постельных сценах с Иваном Янковским. Гарик Харламов не раз заявлял, что разделяет экранный образ жены с реальной жизнью, и не имеет ничего против ее работы в кино. Однако многие начали критиковать Кристину Асмус за то, что ее роль в «Тексте» слишком откровенна для жены и матери.
Гарик Харламов и Кристина Асмус с дочерью Настей
Читайте также:
Стала известна дата выхода сериала «Гусар» с Гариком Харламовым
Гарик Харламов озвучит Волка в новых сериях мультфильма «Ну, погоди!»
Болеющий коронавирусом Гарик Харламов рассказал, что все силы и деньги вложил в свой новый сериал «Гусар»
Илья Прусикин заменил Гарика Мартиросяна в Comedy Club
https://ria.ru/20210514/prusikin-1732357562.html
Илья Прусикин заменил Гарика Мартиросяна в Comedy Club
Илья Прусикин заменил Гарика Мартиросяна в Comedy Club — РИА Новости, 14.05.2021
Илья Прусикин заменил Гарика Мартиросяна в Comedy Club
Илья Прусикин, фронтмен группы Little Big стал гостем нового выпуска шоу Comedy Club и сделал с Гариком Харламовым совместный юмористический номер, сообщили в… РИА Новости, 14.05.2021
2021-05-14T18:07
2021-05-14T18:07
2021-05-14T18:07
культура
новости культуры
гарик мартиросян
гарик харламов (игорь)
тнт (телеканал)
звезды
знаменитости
/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content
/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content
https://cdn21.
img.ria.ru/images/07e5/05/0e/1732358956_0:0:2000:1126_1920x0_80_0_0_38a050a486dd1ad6dbf51254fb9eeded.jpg
МОСКВА, 14 мая — РИА Новости. Илья Прусикин, фронтмен группы Little Big стал гостем нового выпуска шоу Comedy Club и сделал с Гариком Харламовым совместный юмористический номер, сообщили в пресс-службе телеканала ТНТ. Ранее в подобных миниатюрах играл Гарик Мартиросян. Он исполнял роль продюсера, который отбирает участников на популярный конкурс. Одним из претендентов обязательно был герой Гарика Харламова. Персонаж всегда доводил организатора до предела, а зал до смеха, когда пел переделанные на злободневные темы популярные композиции. Но теперь Илье Прусикину придется «терпеть» эпатажного конкурсанта и аккомпанировать ему на синтезаторе. Полный выпуск покажут на телеканале ТНТ в 21:00.
https://ria.ru/20210429/rammstein-1730539309.html
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.
xn--p1ai/awards/
2021
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
Новости
ru-RU
https://ria.ru/docs/about/copyright.html
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
https://cdn22.img.ria.ru/images/07e5/05/0e/1732358956_10:0:1787:1333_1920x0_80_0_0_b6f6ccf46968c2446d259e442bd6a5f1.jpg
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
новости культуры, гарик мартиросян, гарик харламов (игорь), тнт (телеканал), звезды, знаменитости
МОСКВА, 14 мая — РИА Новости.
Илья Прусикин, фронтмен группы Little Big стал гостем нового выпуска шоу Comedy Club и сделал с Гариком Харламовым совместный юмористический номер, сообщили в пресс-службе телеканала ТНТ.
«Харламов вместе с Ильичом из Little Big устроят новый кастинг на Евровидение, — говорится в описании их выступления.
Ранее в подобных миниатюрах играл Гарик Мартиросян. Он исполнял роль продюсера, который отбирает участников на популярный конкурс.
Одним из претендентов обязательно был герой Гарика Харламова. Персонаж всегда доводил организатора до предела, а зал до смеха, когда пел переделанные на злободневные темы популярные композиции.
Но теперь Илье Прусикину придется «терпеть» эпатажного конкурсанта и аккомпанировать ему на синтезаторе.
Полный выпуск покажут на телеканале ТНТ в 21:00.
29 апреля, 19:49КультураИлья Прусикин похвастался фотографией с Тиллем Линдеманном
Гарик Харламов | SRSLY.RU
Влиятельный резидент Comedy Club, скетчмейкер, Эдуард Суровый и просто русский двойник Мэтта Деймона.
Комедия у Гарика буквально в крови. Еще ребенком он устраивал целые представления для родных и друзей, чтобы их рассмешить. Это здорово пригодилось ему в подростковые годы, когда в 14 лет вместе с отцом Игорь переехал в Чикаго и там посещал занятия в молодежной школе-театре «Харендт» под руководством Билли Зейна — звезды «Титаника». Обучение стоило недешево, поэтому Гарик часто подрабатывал в магазинах и забегаловках.
В 19 лет вернулся в Москву и поступил на вполне себе обычный факультет управления персоналом в ГУУ. Харламов думал о театральном, но идти туда побоялся, чтобы не оказаться потом без денег под мостом. Но и в студенчестве продолжал выступать: вместе с двоюродным братом пел песни и рассказывал анекдоты в метро и на Арбате. Чуть позже, как и 90 процентов комиков в России, начал играть в КВН. В составе команды «Незолотая молодежь» Гарик вышел в Высшую лигу.
В 2005 году команда КВН «Новые армяне» решила запустить на ТНТ свое собственное шоу — Comedy Club.
Чисто американский формат был совершенно новым для русского телевидения, но Гарик рискнул и согласился присоединиться к проекту. Это принесло ему и другим резидентам огромную популярность.
На протяжении нескольких лет Comedy Club был самым успешным проектом ТНТ. Резиденты запускали свои шоу — своеобразные спин-оффы персонажей, которых изображали в «Камеди», снимали фильмы и сериалы. Так появилась на свет серия «Самый лучший фильм», в которой Харламов не только исполнял главные роли, но также выступал продюсером и сценаристом.
С тех пор как начался Comedy Club, я изменился: стал шире в три раза.
В 2009 году, после четырех лет в коллективе, Харламов решает покинуть «Камеди»: формату нужна была свежая кровь, Гарик считал, что сам он для шоу уже староват. Правда, в осенью 2011-го он обратно в шоу, а спустя два замутил программу «ХБ», которую вел с бывшим коллегой по «Камеди» Тимуром Батрутдиновым. Все это время Харламов часто появлялся в мелких ролях в комедийных сериалах и шоу, много снимался в рекламе.
С 2018 года Гарик регулярно выпускает вместе с Батрутдиновым ролики на ютьюб-канале «Ошуительное Хоу». Дважды был гостем «Зашкварных историй», участвовал в «Что было дальше?» и «#СОЗВОНе». В общем, в интернет-пространстве Харламова тоже сложно не заметить. В конце 2019-го на ТНТ состоялась премьера первого в нашей стране ностальгического мокьюментари «Эдуард Суровый. Слезы Брайтона» — про музыкальное альтер эго Гарика, а в 2020-м Харламов стал голосом Волка в новых сериях мультфильма «Ну, погоди!».
Личная жизнь
До брака с Кристиной Асмус был женат на Юлии Лещенко, отношения с которой распались после двух лет совместной жизни. В 2013-м женился на Асмус, а спустя год у них родилась дочь Анастасия.
В 2019 году вышел фильм «Текст» с очень откровенной сценой с участием Кристины Асмус, и инстаграм шоумена заполонили гневные комментарии.
Как же комик позволил супруге сняться в эротической сцене с другим актером? То, что это работа Кристины и вообще далеко не первая постельная сцена в истории кино, подписчиков абсолютно не смущало. Сначала Гарик игнорировал комментарии, но через какое-то время их стало так много, что Харламов начал едко отвечать на самые популярные. Ко всей ситуации он относится с недоумением и легким гневом, но с юмором.
В июне 2020 года пара объявила о разводе. И Гарик, и Кристина отметили, «что ни фильм «Текст», ни самоизоляция, ни кто-то третий в этом не виноват» — решение разойтись созревало целый год.
Гарик Харламов высмеял Кристину Асмус в пародии телешоу «Холостяк»
Передачу назвали «Харластяк», тем самым подшутив над названием оригинала шоу.
Фото: peopletalk.ru
В последнем
выпуске Comedy Club на телеканале ТНТ показали пародию на шоу «Холостяк», а
главным героем стал – Гарик Харламов.
В ролике комик публично высмеял актрису
Кристину Асмус, с которой на сегодняшний день разводится.
Передачу назвали «Харластяк», тем самым подшутив над названием оригинала
шоу. Закадровый голос в пародии говорит, что «тот, кто стал этим летом одинок,
найдет свою любовь», а Харламов стоит с розой в руках, ожидая участниц. Одну за
другой комик отправляет обратно, потому что они чем-то напоминают Асмус, либо
именем, либо профессией и т.
д.
Стоит
отметить, что в конце короткого видео юморист, не выдержав, кричит «Вы
издеваетесь?!». И тогда голос за кадром
сообщает: «После долгих поисков мы нашли девушку, которая подойдет ему
идеально» и из автомобиля выходит девушка с усами, черты лица которой сильно
напоминают другого резидента — Тимура Батрутдинова.
Напомним, в конце июня текущего года Резидент Comedy Club Гарик Харламов и актриса Кристина Асмус объявили о своем разводе.
Пара заявила, что решение было принято ими совместно год назад, и выразили надежду, что смогут остаться друзьями.
Больше новостей в Телеграм-канале @RepostUZ.
Больше новостей в Телеграм-канале
Подписаться
ТНТ покажет новый сериал «Гусар» с Гариком Харламовым в главной роли — Новости культурной жизни Владивостока
24 августа 2020
Разное
ТНТ покажет новый сериал «Гусар» с Гариком Харламовым в главной роли
Этой осенью телеканал ТНТ покажет долгожданную премьеру комедийного сериала «Гусар» от Comedy Club Production, в котором Гарик Харламов перевоплотится в Григория Савельевича Рыльского, поручика лейб-гвардии гусарского полка, эксцентричного любителя женщин, алкоголя и приключений.
Это первая большая роль Гарика Харламова в художественном сериале.
Несмотря на исторический сюжет, «Гусар» — это актуальная история о герое, которого так не хватает нашему времени. Он грубоватый, зато честный и романтичный, никогда не унывает и бесстрашно кидается на защиту слабых.
«Гусар» обещает стать самым смешным сериалом сезона, в котором фирменный юмор ТНТ и бессменного резидента Comedy Club Гарика Харламова будет бить и по современности, и по прошлому, и даже по будущему.
1812 год. Поручик Григорий Рыльский должен доставить Кутузову секретные документы. Как только они попадут к полководцу, русская армия начнет наступление. Но по пути в штаб Рыльский заглядывается на девицу и загадочным образом исчезает.
Наше время. Молодой ученый Дмитрий Журавлев десять лет посвятил созданию машины времени, пока его жена Катя зарабатывала деньги и тащила на себе весь быт. Ей надоело, что Митя женат не на ней, а на машине времени, и в день, когда она решила сообщить супругу о расставании, в их доме прямиком из 1812 года оказывается Рыльский — Катин предок.
Попытка вернуть поручика обратно заканчивается поломкой машины времени, и до тех пор, пока Митя ее не починит, Рыльский будет жить в нашем веке. Гусару предстоит открыть для себя телевидение, электричество, интернет и другие прелести будущего, а еще посмотреть, во что превратились бывшие жандармы — нынешние полицейские, и удивиться понятиям чести в интерпретации современных мужей.
Вместе с Гариком Харламовым в сериале снялись Павел Рассомахин, Екатерина Ковальчук, Сергей Белов, Екатерина Радченко и др.
Гарик Харламов: «Это первая моя большая роль, в которой я с первой до последней серии играл одного персонажа. Для меня это необычный опыт, и я могу сказать, что «Гусар» — самый сложный проект в моей жизни! Мы снимали сериал на протяжении полутора лет, успели пережить карантин, сниматься в других проектах… Съемки шли и летом, и зимой, и в павильонах, и на исторических объектах. Мой персонаж совершенно своеобразен, он настоящий гусар того времени. У него свой язык, нрав, темперамент, он не похож ни на кого.
Мы с ним разные люди, конечно. Но Григорий Савельевич и Гарик Харламов все же в чем-то похожи!»
«Гусар» — этой осенью на ТНТ!
|
|
Прием федеральной и региональной рекламы на телевидении осуществляется централизованно — в воронежском офисе агентства MEDIA SM
|
Его жанровая структура: реалити-шоу, скетч-шоу, мультсериалы, сериалы, кинофильмы. Канал не стоит на месте и постоянно обновляет свою сетку передач.
| Городской округ Брянск (427426 чел.) | Выгоничский район (22393 чел.) | |
| Брянский район (55817 чел.) | Городской округ Сельцо (18015 чел.) | |
| Городской округ Фокино (14674 чел.) |
Заказать рекламу на телеканале ТНТ Брянск
Заказать рекламу на канале Вы можете, позвонив в центральный офис национального пункта приема рекламы Media SM, по телефонам «горячей» линии: 8 (800) 707-22-15 (с 9-00 до 18-00 MSK).
РЕКЛАМНЫЕ КАМПАНИИ в СМИ
+ ЗАМЕРЫ ЭФФЕКТИВНОСТИ:
Для клиентов, заказывающих разработку и проведение рекламной кампании мы предлагаем БОНУС в виде сопутствующих услуг по анализу ее эффективности, включая опросы целевых аудиторий с выборками до 800 человек.
Анализ эффективности рекламных кампаний клиентов осуществляется компанией «Старт Маркетинг» в рамках инновационной программы совершенствования маркетинговых процессов на российских предприятиях.
Все работы проводятся БЕЗВОЗМЕЗДНО!
Архив Гарика Харламова — World Today News
Наталья Михеева Актриса Екатерина Ковальчук похвасталась шикарным букетом роз. Екатерина Ковальчук. Фото: instagram.com/katerinakovalchyk/ Новая возлюбленная уже дважды разведенного шоумена и продюсера Гарика Харламова Екатерина Ковальчук поделилась кадрами микроблога, на которых она появилась с огромным букетом спелых роз малинового цвета.
«Давайте устроим вечеринку роз!» — подпись […]
Алексей Заякин В программе разыграли забавную сценку, пародирующую популярный проект.Филипп Киркоров. Фото: Globallookpress.com На шоу Comedy Club на ТНТ в одной из сцен пародировали популярное шоу «Маска». По сюжету жюри в составе Гарика Харламова, Марины Кравец и Александра Реввы должно было угадать, кто […]
Алексей Заякин В одиночестве комику не скучно. Гарик Харламов. Фото: Globallookpress.com Шоумен Гарик Харламов, который в прошлом году развелся с женой, актрисой Кристиной Асмус, в эфире Comedy Club на канале ТНТ неожиданно заговорил о своей личной жизни.Отметим, что известный российский боец Петр Ян приехал в гости к […]
Алексей Заякин Семилетняя наследница звезды с юмором подошла к важной дате в жизни родителя. Кристина Асмус и Гарик Харламов. Фото: Globallookpress.com Дочь актрисы Кристины Асмус и комика Гарика Харламова семилетняя Настя в Instagram оригинально и с юмором поздравила маму с 33-летием. […]
Анна Адамайтес Ее снимок активно обсуждается в сети пользователями.
Кристин Асмус. Фото: instagram.com/asmuskristina/ В июне 2020 года стало известно о расставании Кристины Асмус и Гарика Харламова, пары, которая казалась идеальной с 2013 года. Как и многие другие общественные деятели, они не смогли пережить тяжелый период пандемии. хотя […]
Алексей Заякин Сама звезда сериала «Воронин», сам того не ожидая, обидела юмориста. Екатерина Волкова. Фото: Globallookpress.com Актриса Екатерина Волкова в Instagram, видимо, сам того не осознавая, обидела юмориста Гарика Харламова, посмеявшись над его фигурой.В своем сообщении она подняла тему маленькой женской груди и связанных с ней комплексов. Как […]
32-летняя Кристина Асмус поделилась свежим летним снимком. А августовские каникулы актриса из фильма «Текст» Клима Шипенко, судя по расположению, проводит на море. Экс-возлюбленная резидента Comedy Club Гарика Харламова позировала на балконе гостиничного номера, продемонстрировав модный наряд. Знаменитость примерила […]
Алексей Заякин Шоумен очень повеселил своих подписчиков.
Харламов продолжил троллить Гузееву / http: //globallookpress.com/ Юморист Гарик Харламов в Instagram поделился забавными снимками. С помощью специальной программы он показал, как будут выглядеть его дети от актрисы Анджелины Джоли, модели Ирины Шейк, актера Гоши Куценко, шоумена и его друга Тимура Батрутдинова и […]
В недавнем интервью Алексей Учитель рассказал о новинках. творческие достижения. Режиссер заметил, что один из его учеников — Филипп Юрьев — около семи лет писал сценарий к фильму «Китобои».Съемки проходили на Камчатке. По словам режиссера, в ближайшее время эта работа будет показана на одной из […]
Кристина Асмус. Некоторые даже назвали актрису ходячей. Теперь, после известия о разводе, каждый шаг Гарика Харламова и Кристины Асмус изучается поклонниками под микроскопом. Пока что звездные коллеги по-прежнему супруги дипломатично комментируют разрыв после восьми лет совместной жизни. Фолловеры в Инстаграм в выражениях не стесняются. […]
Холостяк-8 (2021) Россия смотреть онлайн на бесплатном реалити-шоу ТНТ ⋆ Youtebem
О сюжете шоу «Холостяк 8 сезон» 2021 / Россия / Развлечения / Канал ТНТ / Реалити
П Представляем вашему вниманию продолжение рейтингового реалити-шоу Холостяк с Тимати.
Новый сезон однозначно отличается от предыдущих. Меняются правила, меняется ведущий, им был бывший участник украинского холостяка Никита Добрынин. На этот раз руководство проекта не скрыло личности главного героя, выбор пал на известного рэп-исполнителя Тимура Юнусова.
У Тимати довольно большой опыт отношений, много романов, двое детей, гражданский брак, но он полон надежд встретить свою любовь на проекте. Смогут ли девушки победить опытного героя, заставят ли они его снять маску, отдаться чувствам и открыть прекрасное будущее.За внимание Тимати поборются 25 красавиц — тайные встречи, удивительные свидания, захватывающие виды. Поможет ли все это и найдет ли он себе достойную, конечно, сезон покажет.
Трейлер программы «Холостяк с Тимати» | Премьера 14 марта 2021
Смотреть реалити-шоу «Холостяк 8 сезон » ( 2021) бесплатно онлайн все серии подряд hd 720-1080
.
Понравилось шоу? Если да, то поделитесь с друзьями и сделайте их тоже счастливыми!)
.
Подробнее мыльной оперы «Холостяк с Тимати» 2021 онлайн бесплатно, фильм на youtube в хорошем качестве HD 720-1080 все серии подряд на YouTube — так же возможно на планшетах и смартфонах android, ipad, iphone (iPad, iPhone , Android) и на других мобильных устройствах смотреть фильм шолостяк тимати на тнт 2021 онлайн на развлекательном сайте youtebem.com
.
Спасибо, что были с нами! Желаем приятного отдыха и отличного настроения!
.
.
Дата выхода и информация о шоу «Холостяк-8 Россия» 2021 на ТНТ:
Страна: Россия
.
Ведущий: Михаил Белянин
Производство: Comedy Club Производство на канале ТНТ
Премьера: 14 марта 2021 г.
Жанр: Развлекательный, шоу
.
.
Смотрите еще больше увлекательных телешоу ⇒ COMFORT ZONE 2020 COMEDY
Вокальный криминальный ансамбль 2019 DILDY 2 SEASON 2021 COMEDY
CIFR-2 2020 СВЕТЛАНА 2018 ДЕКАБРИСТ 2018 САМА ДУРА 2020 КОМЕДИЯ
КРЫЛЬЯ ИМПЕРИИ АЛЖИР РОСТОВ 2019 RUMMATE 2020 ZORGE LEAP
КАПИТАН-2 ВОЛШЕБНИК СЕРДЦЕ МАТЕРИ ПРАКТИК ЧЕРНАЯ МАТЕРИЯ
ОСНОВАНИЕ СВЕТЛАНЫ СОТНИ ДНЕЙ СВОБОДЫ ПОСЛЕДНИЙ БОЕВОЙ ЗАЩИТНИК
ЭКСПРОПРИАТОР МАГОМАЕВ СВАДЬБЫ И РАЗВОДЫ ШУША 2020 СПАССКАЯ
Цыганский галечный и Гамаюн БАЛАБОЛЬСКИЙ ПЕСОЧНЫЙ ЗАМОК КАЗАНОВА 2020
ЖИВАЯ ШАХТА ПУСТЫНИ ЗВЕЗДА ТЕНЕЙ 2020 ЗАЩИТНОЕ ЧЕТВЕРТОЕ ИЗМЕНЕНИЕ
TOBOL STRONG WEAK WOMAN SORCH FAVORITE CHILDREN RUMMATE 2020
YOU ARE MY 2020 IP PIROGOVA 3 SEASON гости из прошедшего 2020 SHADOW BACK
.
Плейлист YouTube — Сборник комедийных выступлений | Приятного просмотра!
.h-text, .bscb-21846 .section-heading.sh-t6> .h-text: before, .bscb-21846.bscb-21846.bscb-21846.bscb-21846 .section-heading.sh-t6> .main-link> .h-text, .bscb-21846.bscb-21846.bscb-21846.bscb-21846 .section-heading.sh-t6> .main-link> .h-text: before, .bscb- 21846.bscb-21846 .section-heading.sh-t6> a: first-child: last-child> .h-text, .bscb-21846.bscb-21846 .section-heading.sh-t6> a: first- ребенок: последний ребенок>.h-text: before, .bscb-21846.bscb-21846 .section-heading.sh-t6.sh-s3> a: first-child: last-child> .h-text {background-color: # dd003b}. bscb-21846.bscb-21846.bscb-21846.bscb-21846 .section-heading.sh-t6.sh-s3> .main-link> .h-text: before, .bscb-21846.bscb-21846 .section -heading.sh-t6.sh-s3> a: last-child: first-child> .h-text: before, .bscb-21846.bscb-21846 .section-heading.sh-t6.sh-s3>. h-text: last-child: first-child: before {border-bottom-color: # dd003b} .bscb-21846.bscb-21846 .listing-item: hover .title a ,.bscb-21846.bscb-21846 .listing-item-text-1 .post-meta a: hover, .bscb-21846.bscb-21846 .listing-item-grid .post-meta a: hover, .bscb-21846. bscb-21846 .listing-item .rating-stars span: before {color: # dd003b! important} .bscb-21846.bscb-21846 .listing-item .rating-bar span, .bscb-21846.bscb-21846 .listing -item .post-count-badge.pcb-t1.pcb-s1, .bscb-21846.bscb-21846.better-newsticker .heading {background-color: # dd003b! important} .bscb-21846.bscb-21846. better-newsticker .heading: после {border-left-color: # dd003b! important}.bscb-21846 .bs-pagination .btn-bs-pagination: hover, .bscb-21846 .btn-bs-pagination.bs-pagination-in-loading {background-color: # dd003b! important; border-color: # dd003b ! important; color: #fff! important} .bscb-21846 .listing-item-text-2: hover .item-inner {border-color: # dd003b! important} .bscb-21846.bscb-21846.bscb-21846 .bscb-21846 .term-badges.floated .term-badge a, .bscb-21846.bscb-21846 .bs-pagination-wrapper .bs-loading> div {background-color: # dd003b! important; color: #fff !важный}
]]]]>]]>
ГУМ ЛУЧШИЙ
Автор Comedy Club
1 / Xnumx
- 1
Comedy Club «Идеальный мужчина» Иван Половинкин
PM08: 04 - 2
Comedy Club «Американское Радио» Гарик Мартиросян, Гарик Харламов, Андрей Скороход, Тимур Батрутдинов
PM09: 38 - 3
Comedy Club «Взятка» Антон Иванов, Костя Бутусов
PM08: 58 - 4
Comedy Club «Гостеприимство» Демис Карибидис, Дмитрий Кожома, Иван Пышненко
PM08: 41 - 5
Comedy Club «Рэп о городах» Женя Синяков.
PM07: 34 - 6
Comedy Club «Валентин, выпьем!» Демис Карибидис, Марина Кравец, Андрей Скороход
PM13: 47 - 7
Comedy Club Андрея Бебуришвили о самолетах и поездах
PM06: 28 - 8
Comedy Club «Не очень хороший человек» Гарик Харламов, Марина Кравец, Демис Карибидис
PM10: 11 - 9
Comedy Club «Дом или квартира» Иван Половинкин
PM07: 11 - 10
Comedy Club «Муж спал» Демис Карибидис, Марина Кравец, Тимур Батрутдинов
PM08: 32 - 11
Comedy Club Харламов, Воля, Канделаки, Арустамян, Адамян, Кузнецов, Кириленко, Шабанова, Вадеева
PM17: 24 - 12
Comedy Club «Футбол переоценен» Павел Воля
PM14: 19 - 13
Комеди-бар.Эксклюзив на день рождения Марины Кравец
PM22: 19 - 14
Comedy Club «Вист» Антон Иванов, Костя Бутусов
PM09: 09 - 15
Comedy Club «Кастинг на Евровидение» Ильич, Гарик Харламов
PM07: 38 - 16
Comedy Club Миа Бойка, Евгения Медведева, Петр Ян, Гарик Харламов, Павел Воля
PM16: 42 - 17
Комедийный клуб «РосГосОскар» USB
PM06: 48 - 18
Comedy Club «Кто это делает» Карибидис, Матуа, Аверин, Сорокин, Батрутдинов, Иванов, Грачев
PM13: 01 - 19
Comedy Club «Осторожно, мошенники» Женя Синяков
PM09: 42 - 20
Comedy Club «Эдуард Харш» Гарик Харламов, Тимур Батрутдинов
PM17: 49 - 21 год
Comedy Club «Угони машину» Харламов Карибидис Батрутдинов Иванов Гореликов Половинкин Бутусов
PM09: 11 - 22
Comedy Club Иманбек Зейкенов Александр Большунов Павел Воля Гарик Харламов
PM16: 36 - 23
Ерунда какая-то! О чем это? — Матвиенко и сенаторы раскритиковали песню Манижи для Евровидения
PM05: 38 - 24
Comedy Club.Демис Карибидис, Марина Кравец, Яна Кошкина «Я не такая»
PM11: 02 - 25
Comedy Club Павел Воля Как я прыгнул с парашютом
PM16: 35 - 26
Комеди-бар.Эксклюзивный
PM36: 15 - 27
Comedy Club Хабиб Шарипов, «Актеры дубляжа», Кирилл Колесников, Андрей Есипенко, Воля, Харламов.
PM24: 48 - 28 год
Comedy Club Демис Карибидис Марина Кравец «Поймешь, простишь»
PM14: 09 - 29
Comedy Club Roy Jones DJ Smash Эльдар Джарахов Павел Воля Гарик Харламов
PM13: 37 - 30
Comedy Club «Ростехнологии» Павел Воля
PM13: 11 - 31 год
Comedy Club «Современная семья» Антон Иванов Костя Бутусов
PM07: 49 - 32
Comedy Club Little Big Лев Лещенко Интеллект
PM12: 53 - 33
Comedy Club «Елена» Демис Карибидис Тимур Батрутдинов
PM09: 39 - 34
Эксклюзивные часы в марте в Comedy Club
PM16: 35 - 35 год
Comedy Club «7 марта» Гарик Харламов Марина Федункив
PM11: 18 - 36
Comedy Club «Юрец и Лев Лещенко» Демис Карибидис Зураб Матуа Андрей Аверин
PM10: 17 - 37
Comedy Club «Вопросы к женщинам» Иван Половинкин
PM06: 12 - 38
Comedy Club Валя Карнавал Гарик Харламов Павел Воля
PM07: 58 - 39
Comedy Club Exclusive Как снимались новые выпуски
PM16: 08 - 40
Comedy Club Новый сезон С 26 февраля на ТНТ
PM00: 31 - 41 год
Comedy Club «Остановили гаишников» Андрей Бебуришвили
PM08: 58 - 42
Comedy Club «Знакомство» Марина Федункив Тимур Батрутдинов Александр Ревва
PM08: 18 - 43 год
Comedy Club «Там кто-то ходит» Гарик Харламов Тимур Батрутдинов Демис Карибидис
PM10: 47 - 44 год
Comedy Club «Русская кухня» Гарик Харламов Тимур Батрутдинов
PM09: 33 - 45
Comedy Club «Night Club» Марина Кравец Гарик Харламов Демис Карибидис
PM06: 48 - 46
Comedy Club Гарик Харламов Павел Воля Дизайн человека
PM12: 09 - 47
Comedy Club новогодний выпуск 2021 года «Короли вечеринки»
01:07:55 - 48
Comedy Club Демис Карибидис Марина Кравец Тимур Батрутдинов «Изнасилование»
PM11: 36 - 49
Comedy Club Воля Харламова Дина Саева Зиверт
PM16: 20 - 50
Comedy Club Захар Мокроусов «Пощекочу»
PM05: 48
.
Кадры из спектакля «Холостяк-8» 2021 Россия | Фото участников
….
Сурамин ингибирует апоптоз, индуцированный рецептором смерти in vitro и молниеносное апоптотическое повреждение печени у мышей
Krammer, P.H., Galle, P.R., Moller, P. & Debatin, K.M. CD95 (APO-1 / Fas) -опосредованный апоптоз в нормальных и злокачественных клетках печени, толстой кишки и кроветворных клетках. Adv. Cancer Res. 75 , 251–273 (1998).
CAS
Статья
Google ученый
Краммер П.Апоптоз, опосредованный H. CD95 (APO-1 / Fas): живи и дай умереть. Adv. Иммунол. 71 , 163–210 (1999).
CAS
Статья
Google ученый
Galle, P.R. et al. Участие рецептора и лиганда CD95 (APO-1 / Fas) в повреждении печени. J. Exp. Med. 182 , 1223–1230 (1995).
CAS
Статья
Google ученый
Воогд, Т.E., Vansterkenburg, E.L., Wilting, J. & Janssen, L.H. Недавние исследования биологической активности сурамина. Pharmacol. Ред. 45 , 177–203 (1993).
CAS
PubMed
Google ученый
Mitsuya, H. et al. Сурамин защита Т-клеток in vitro от инфекционности и цитопатического действия HTLV-III. Science 226 , 172–174 (1984).
CAS
Статья
Google ученый
Ярчоан, Р.И Бродер, С. Разработка антиретровирусной терапии синдрома приобретенного иммунодефицита и связанных с ним заболеваний. Отчет о проделанной работе. N. Engl. J. Med. 316 , 557–564 (1987).
CAS
Статья
Google ученый
Cheson, B.D. и другие. Сураминотерапия при СПИДе и связанных с ним расстройствах. Отчет рабочей группы США по сураминам. J. Am. Med. Доц. 258 , 1347–1351 (1987).
CAS
Статья
Google ученый
Аллолио, Б.и другие. Лечение метастатической карциномы надпочечников сурамином. Dtsch. Med. Wochenschr. 114 , 381–384 (1989).
CAS
Статья
Google ученый
La Rocca, R.V., Stein, C.A. И Майерс, С.Е. Сурамин: прототип нового поколения противоопухолевых соединений. Cancer Cells 2 , 106–115 (1990).
CAS
PubMed
Google ученый
Эйзенбергер, М.А. и Рейно, Л.М. Сурамин. Лечение рака. Ред. 20 , 259–273 (1994).
CAS
Статья
Google ученый
Krueger, A., Schmitz, I., Baumann, S., Krammer, P.H. & Kirchhoff, S. Клеточные варианты сплайсинга белка, ингибирующие FLICE, ингибируют различные стадии активации каспазы-8 в сигнальном комплексе, индуцирующем гибель CD95. J. Biol. Chem. 276 , 20633–20640 (2001).
CAS
Статья
Google ученый
Мюллер, М.и другие. p53 активирует ген CD95 (APO-1 / Fas) в ответ на повреждение ДНК противораковыми препаратами. J. Exp. Med. 188 , 2033–2045 (1998).
CAS
Статья
Google ученый
Eichhorst, S.T., Muerkoster, S., Weigand, M.A. & Krammer, P.H. Химиотерапевтический препарат 5-фторурацил индуцирует апоптоз в тимоцитах мыши in vivo через активацию системы CD95 (APO-1 / Fas). Cancer Res. 61 , 243–248 (2001).
CAS
PubMed
Google ученый
Collette, Y., Razanajaona, D., Ghiotto, M. & Olive, D. CD28 может способствовать выживанию Т-клеток посредством механизма, независимого от фосфатидилинозитол-3-киназы. Eur. J. Immunol. 27 , 3283–3289 (1997).
CAS
Статья
Google ученый
Скаффиди, К.и другие. Два сигнальных пути CD95 (APO-1 / Fas). EMBO J. 17 , 1675–1687 (1998).
CAS
Статья
Google ученый
Рохлин О.В. и другие. Fas-опосредованный апоптоз в клеточных линиях карциномы предстательной железы человека. Cancer Res. 57 , 1758–1768 (1997).
CAS
PubMed
Google ученый
Troy, C.M. И Шеланский, М.L. Caspase-2 redux. Cell Death Differ. 10 , 101–107 (2003).
CAS
Статья
Google ученый
Sprick, M.R. et al. Каспаза-10 рекрутируется и активируется в нативных сигнальных комплексах, вызывающих смерть TRAIL и CD95, FADD-зависимым образом, но не может функционально замещать каспазу-8. EMBO J. 21 , 4520–4530 (2002).
CAS
Статья
Google ученый
Огасавара, Дж.и другие. Смертельный эффект антитела против Fas у мышей. Nature 364 , 806–809 (1993).
CAS
Статья
Google ученый
Jaeschke, H. et al. Активация протеаз, подобных каспазе 3 (CPP32), важна для TNF-α-индуцированного апоптоза паренхиматозных клеток печени и опосредованного нейтрофилами некроза в модели мышиного эндотоксинового шока. J. Immunol. 160 , 3480–3486 (1998).
CAS
PubMed
Google ученый
Петерлин, Б.М. и Троно, Д. Скрыть, защитить и нанести ответный удар: как ВИЧ-инфицированные клетки избегают иммунной ликвидации. Nat. Rev. Immunol. 3 , 97–107 (2003).
CAS
Статья
Google ученый
Kuyu, H., Lee, W.R., Bare, R., Hall, M.C. И Торти, Ф. Последние достижения в лечении рака простаты. Ann. Онкол. 10 , 891–898 (1999).
CAS
Статья
Google ученый
Малый, E.J. et al. Рандомизированное исследование трех различных доз сурамина, вводимых с фиксированным графиком дозирования у пациентов с распространенным раком простаты: результаты межгрупповой 0159, рака и лейкемии группы B 9480. J. Clin. Онкол. 20 , 3369–3375 (2002).
CAS
Статья
Google ученый
Song, S., Wientjes, M.G., Gan, Y. & Au, J.L. Факторы роста фибробластов: эпигенетический механизм устойчивости широкого спектра к противораковым препаратам. Proc. Natl. Акад. Sci. США 97 , 8658–8663 (2000).
CAS
Статья
Google ученый
Чжао, X.M. и другие. Костимуляция CD4 + Т-клеток человека фактором роста фибробластов-1 (кислый фактор роста фибробластов). J. Immunol. 155 , 3904–3911 (1995).
CAS
PubMed
Google ученый
Хигучи, Х.и другие. Желчные кислоты стимулируют фосфорилирование cFLIP, усиливая TRAIL-опосредованный апоптоз. J. Biol. Chem. 278 , 454–461 (2003).
CAS
Статья
Google ученый
Reinehr, R., Graf, D., Fischer, R., Schliess, F. & Haussinger, D. Гиперосмолярность запускает перенос CD95 через мембрану и повышает чувствительность гепатоцитов крысы к индуцированному CD95L апоптозу. Гепатология 36 , 602–614 (2002).
CAS
Статья
Google ученый
Huwiler, A., Rolz, W., Dorsch, S., Ren, S. & Pfeilschifter, J. Внеклеточные АТФ и УТФ активируют каскад протеинкиназы B / Akt через пуриноцептор P2Y2 в мезангиальных клетках почек. Br. J. Pharmacol. 136 , 520–529 (2002).
CAS
Статья
Google ученый
Ламбрехт, Г.и другие. Взаимосвязь структура-активность производных сурамина и пиридоксаль-5′-фосфата как антагонистов рецептора P2. Curr. Pharm. Des. 8 , 2371–2399 (2002).
CAS
Статья
Google ученый
Харламов, А., Джонс, С.С. и Ким, Д.К. Сурамин уменьшает объем инфаркта в модели очаговой ишемии мозга у крыс. Exp. Brain Res. 147 , 353–359 (2002).
CAS
Статья
Google ученый
Чен, Э.Ю., Мазуре, Н.М., Купер, Дж. И Джачча, А.Дж. Гипоксия активирует путь рецептора тромбоцитарного фактора роста / фосфатидилинозитол-3-киназы / Akt, что приводит к инактивации киназы-3 гликогенсинтазы. Cancer Res. 61 , 2429–2433 (2001).
CAS
PubMed
Google ученый
McNally, W.P., DeHart, P.D., Lathia, C. & Whitfield, L.R. Распределение [ 14 C] сурамина в тканях самцов крыс после однократного внутривенного введения. Life Sci. 67 , 1847–1857 (2000).
CAS
Статья
Google ученый
Scaffidi, C., Medema, J.P., Krammer, P.H. & Peter, M.E. FLICE преимущественно экспрессируется в виде двух функционально активных изоформ, каспазы-8 / a и каспазы-8 / b. J. Biol. Chem. 272 , 26953–26958 (1997).
CAS
Статья
Google ученый
Скаффиди, К., Krammer, P.H. И Питер М.Э. Выделение и анализ компонентов сигнального комплекса, вызывающего смерть CD95 (APO-1 / Fas). Методы 17 , 287–291 (1999).
CAS
Статья
Google ученый
Траут, Британская Колумбия и другие. Опосредованная моноклональными антителами регрессия опухоли путем индукции апоптоза. Science 245 , 301–305 (1989).
CAS
Статья
Google ученый
Вальчак, Х.и другие. Опухолевая активность индуцирующего апоптоз лиганда, связанного с фактором некроза опухолей, in vivo . Nat. Med. 5 , 157–163 (1999).
CAS
Статья
Google ученый
Nicoletti, I., Migliorati, G., Pagliacci, M.C., Grignani, F. & Riccardi, C. Быстрый и простой метод измерения апоптоза тимоцитов с помощью окрашивания йодидом пропидия и проточной цитометрии. J. Immunol. Методы 139 , 271–279 (1991).
CAS
Статья
Google ученый
Kischkel, F.C. и другие. Зависимые от цитотоксичности белки, ассоциированные с APO-1 (Fas / CD95), образуют с рецептором индуцирующий смерть сигнальный комплекс (DISC). EMBO J. 14 , 5579–5588 (1995).
CAS
Статья
Google ученый
Medema, J.P. et al. Расщепление FLICE (каспаза-8) гранзимом B во время апоптоза, индуцированного цитотоксическими Т-лимфоцитами. Eur. J. Immunol. 27 , 3492–3498 (1997).
CAS
Статья
Google ученый
Стоит ли смотреть сериал «Гусар»
Гусар
Любителям кино и сериалов не придется скучать днями и ночами! В последние дни на сайте «Кинопоиск» настойчиво демонстрируется баннерная реклама нового комедийного сериала «Гусар» от телеканала ТНТ. Я посмотрела первые серии и готова высказать свое честное зрительское мнение.Но сначала немного информации, которая лично мне показалась интересной …
Итак, сценарий «Гусара» написали девять сценаристов. Также в списке восемь продюсеров (почему так много интересного?), В том числе один из генеральных директоров Гарик Харламов, фактически сыгравший главную роль в сериале «Гусар» …
Гусар
Как по мне, первая серия начинается с очень хорошей шутки. Главнокомандующий внутренними войсками Кутузов раздал наручники одному из своих генералов, а затем обратился к присутствующим и, как отец, поинтересовался, есть ли еще люди, которые хотели бы сдать Москву Наполеону? Шутка хорошая — шутка понравилась.Отличился один из девяти писателей;).
Гусар
Генералы, которые не хотят, чтобы те же люди замечали, что они говорят, что французская армия превосходит российскую армию и, похоже, нет никаких шансов — нужно отступить и отдать Москву врагу.
Но у Михаила Илларионовича есть козырь в рукаве — бравый гусарский лейтенант Григорий Савельевич Рыльский. Ну вы понимаете намек на лейтенанта Ржевского — да ?;). Этот лейтенант — ловкое ворчание, меткий стрелок, но у него есть большой недостаток.Даже два. Он любит веселые напитки, его пол женский. И без всяких мер!
И вот наш герой, добыв секретную карту прямо из французского лагеря, из палатки одного из французских генералов, на полном ходу мчится к своему лагерю. Карта ценная — на ней показаны расположение и план атаки французских войск.
Ни вражеская пехота, ни кавалерия не справятся с лихим гусаром, а вот красивая крестьянка стирает одежду с моста.Лейтенант Рыльский не может преодолеть такое препятствие на пути! Нельзя пропустить красоту отечественного производства!
Гусар
Но время любовных романов случилось странно — лейтенант пропал с 1812 года и оказался в 2020 году. Причина тому — некая машина времени, которую молодой ученый создал в своей квартире. Вы тоже сразу вспомнили фильм Леонида Гайдая 1973 года «Иван Васильевич меняет профессию»? Да-да, идея взята прямо оттуда, хотя вместо царя Ивана Грозного в современную Москву перебрался отважный гусар Григорий Рыльский.
Гусар
Почему этого храброго воина переселили в столицу? Дело в том, что при тестировании машины времени в качестве носителей ДНК использовались волосы девочки Кати, которая является праправнучкой Рыльского. Все можно объяснить просто, логично и научно! 😉
Правда, если в фильме про Ивана Васильевича перенос правителя из прошлого не принес для России особо сильных проблем (ну разве что «царь не настоящий!»), То перенос гусара в наше время , как оказалось, доставила очень много проблем!
Гусар
Проблема номер один — не получив секретную карту из французского штаба, Кутузов тем не менее потерпел поражение от Наполеона с «огромным счетом».«Проблема номер два — когда что-то угрожает жизни лейтенанта, его пра-пра-пра-внучка (и так далее) начинает исчезать — прямо как Марти Макфлай с фотографии из фантастической трилогии« Назад в будущее ». Задача ученого — послать в свое время гусара, чтобы было спасено Отечество и победа в войне 1812 года!
Сам сериал (по крайней мере, первые серии) выглядит забавно. Не здорово, но довольно забавно. Пока можно смотреть …
(PDF) Наноплазмонная атеродеструкция с применением наноболочек кремнезема и золота в качестве нового инструмента для ангиопластики
P172
Морфология митохондриальной сети в постишемических сосудах
Эндотелиальные клетки
B.Рита Алевриаду, BME & Internal Med (кардиология), Davis Heart &
Lung Res Inst, Университет штата Огайо, Колумбус, Огайо; Randy J. Giedt,
BME, Davis Heart & Lung Res Inst, The Ohio State Univ, Columbus,
OH; Метте Преториус-Ибба, Molec & Cell Biochem, Комплексный
Центр рака, Университет штата Огайо, Колумбус, Огайо; Анастасиос
Мацавинос, Департамент математики, Университет штата Айова, Эймс, ИА
Дисфункция эндотелиальных клеток (ЭК) при ранней реперфузии (РП)
связана с эндогенными супероксидными / реактивными формами кислорода (АФК)
поколения.Оксид азота (NO) способствует производству митохондриальных ROS
. Считается, что ишемия (I) / RP-индуцированное повреждение ЭК происходит из-за
митохондриального окислительного стресса, а снижение биодоступности NO
ухудшает ЭК-зависимое расширение коронарных сосудов. У нас есть
, которые показали, что воздействие на культивируемые ЭК стрессом сдвига приводит к продукции, опосредованной NO-
митохондриальными АФК. В целом митохондриальные
АФК приводят к активации митохондриального апоптотического пути.
Недавняя литература предполагает, что индукция митохондриального апоптоза
коррелирует с митохондриальным делением, а образующиеся деполяризованные митохондрии
разрушаются посредством аутофагии, что приводит к выживанию клеток
,
, апоптозу или аутофагической гибели клеток.
Нашей целью является обнаружение и количественная оценка изменений в морфологии митохондрий
из-за воздействия на ЭК моделированного I / RP (с ингибиторами
АФК, NO-синтазы или без митохондриального белка деления
Drp1 или без них), а также определить, эти изменения способствуют аутофагии
и гибели клеток.После обработки ЭК окрашивают зеленым митотрекером
, который используется в сочетании с флуоресцентной микроскопией
для получения цифровых изображений митохондриальной сети.
Морфологические параметры определяются для каждого объекта на изображении
, и они используются для количественного сравнения митохондриальной сети
между обработками. Мы обнаружили, что статические или
сдвинутых ЭК поддерживают свою митохондриальную сеть.
ЭК, подвергнутые гипоксии / реоксигенации (H / RO), претерпевают изменения в морфологии митохондрий
, но деление значительно меньше по сравнению с
, что в ЭК, подвергшихся воздействию I / RP (ишемия моделируется как гипоксия; RP —
смоделировано. как реоксигенация с добавлением потока).Массивное деление
в ЭК, подвергнутых воздействию I / RP, ингибируется антиоксидантами, ингибитором синтазы NO
или ингибитором Drp1 и сопровождается аутофагией
.
Следовательно, ROS, NO и Drp1 все ответственны за индуцированное I / RP
увеличение деления митохондрий. Изменения морфологии митохондрий
могут быть причастны к индукции апоптоза, предполагая, что к
, контролируя морфологию митохондрий, мы сможем уменьшить дисфункцию ЭК
, первый критический шаг в повреждении сердечного I / RP.
B. Alevriadou, грант NIH HL091417 и внутреннее финансирование,
Significant, B. Исследовательский грант; Р. Гедт, Нет; M. Praetorius-Ibba,
AHA, начинающий грант в помощь, и грант ACS на пилотные исследования, Significant,
B. Грант на исследования; А. Мацавинос, Нет.
P173
Несоблюдение предварительных условий для мышей SK2-KO: не без РИСКА!
Людовик Гомес, VCU-VAMC (INSERM U886), Ричмонд (Лион-
ФРАНЦИЯ), Вирджиния; Мелани Пайлар, VCU-VAMC (INSERM U886),
Ричмонд (Лион, Франция), Вирджиния; Джереми К. Аллегуд, VCU-,
Ричмонд, Вирджиния; Нитай К. Хаит, Меган Прайс, Кун Чен, Шелдон
Милстен, Сара Шпигель, VCU, Ричмонд, Вирджиния; Эдвард Дж. Леснефски,
VCU-VAMC, Ричмонд, Вирджиния
Активация сфингозинкиназы-1 (SK-1), вышестоящей киназы
, ответственной за производство сфингозин-1-фосфата (S1P), защищает
сердце от ишемия-реперфузионное повреждение.Недавно мы обнаружили новую функцию
другой изоформы SK, сфингозинкиназы-2 (SK-2),
в митохондриях. Сердечные митохондрии мышей с нокаутом SK-2
обнаруживают снижение окислительного фосфорилирования (OXPHOS) из-за дефекта
в цитохромоксидазе (комплекс IV). В этом исследовании мы
исследовали роль SK-2 в кардиопротекции, вызванной предварительным кондиционированием
. Мыши дикого типа (WT) и трансгенные мыши SK2-KO
подвергались 45 мин.ишемии ПМЖВ in vivo и 24 ч. реперфузии.
Мыши не получали вмешательства (ишемический контроль, IC) или
прекондиционирование (IPC), индуцированное 5-минутной ишемией и 5-минутной
реперфузией перед индексной ишемией. Размер инфаркта был измерен
путем окрашивания ТТС. Во второй группе мышей митохондрии были выделены
через 10 мин. реперфузия; Удерживающая способность кальция (CRC) составляла
, оцененная флуориметрическим методом, и OXPHOS анализировали с использованием электрода типа Clark-
(Таблица 1).У мышей SK2-KO размер инфаркта не уменьшился на
путем предварительного кондиционирования (42 ± 3% против 43 ± 4%, IPC против IC) по сравнению с
у мышей WT (24 ± 3% против 43 ± 3%, р <0,05). Хотя IPC-опосредованная передача сигнала
(путь РИСКА, измеренный с помощью вестерн-блоттинга)
был активирован у мышей WT и SK-2-KO после стимула IPT,
IPC спасал CRC и OXPHOS только у WT, но не у SK2. -КО.
Эти результаты предполагают, что SK-2 необходим для прекондиционирования и
, вероятно, действует ниже пути РИСКА и на уровне S1P в
сердечных митохондриях.
Таблица 1: Митохондрии через 10 мин. реперфузия
CRC
(нмольCa2 + / мг) Oxphox: state3
(натомО / мин / мг
WT IC 588 ± 36
257 ± 7
WT IPC 690 ± 19000
9 *0002 306 SK2-KO IC 550 ± 54
207 ± 18
SK2-KO IPC 525 ± 32
194 ± 24
* p <0,05 по сравнению с соответствующим IC.
L. Gomez, None; M. Paillard, None; JC Allegood, None; NC
Hait, None; M.Цена, Нет; Q. Chen, Нет; С. Мильстиен, Нет; S.
Spiegel, Нет; E.J. Леснефский, Нет.
P174
Сахароза, неферментирующая (Snf1) -связанная киназа (SNRK) увеличивает
клеточную энергию и выживаемость клеток
Эми К. Райнс, Майкл А. Берк, Мохсен Ганефар, Хоссейн
, Северный Ардехали, Чикаго , IL
Неферментирующая сахарозу (Snf1) киназа (SNRK) является гомологом
млекопитающих киназы, активируемой AMP (AMPK).AMPK — это главный метаболический регулятор
, участвующий в патогенезе ишемических повреждений и гипертрофии
, но мало что известно о функции SNRK.
Мы предположили, что SNRK, как и AMPK, стимулирует процессы сохранения энергии. Чтобы идентифицировать процессы, на которые влияет SNRK, мы
использовали массив генов в клетках HEK293, трансфицированных SNRK-GFP и GFP.
Эти исследования показали, что SNRK значительно изменяет транскрипты из
клеточного цикла и путей метаболизма.Затем мы изучили роль
SNRK в контроле клеточного цикла, синтезе ДНК и клеточной пролиферации.
Чтобы изучить роль SNRK в контроле клеточного цикла, мы измерили фазы цикла клеток
в HEK293, трансфицированных SNRK-GFP, мутантном SNRK-T173A-GFP с дефицитом активности киназы
и GFP. SNRK-GFP
увеличивал задержку G0 / G1, как измерено с помощью йодида пропидия.
Соответственно, нокдаун SNRK уменьшил задержку G0 / G1 по сравнению с
без отключения звука.Трансфекция SNRK-GFP также привела к значительному снижению синтеза ДНК и пролиферации клеток. Затем мы
изучили механизм ингибирующей роли SNRK в пролиферации клеток
. Сверхэкспрессия SNRK не изменяла уровни p53 и
p21, но увеличивала уровни мРНК и белка, связывающего кальциклин-связывающий белок
(CACYBP). CACYBP — это новый белок, который усиливает деградацию
Β-катенина, промотора пролиферации.Мы подтвердили, что
SNRK снижает белок-катенин, предполагая, что SNRK увеличивает остановку клеточного цикла
посредством пути CACYBP—катенин. В поддержку
это, нокдаун CACYBP отменил арест пролиферации SNRK. Чтобы определить, поддерживает ли SNRK жизнеспособность клеток
, мы измерили гибель клеток
после обработки h3O2. SNRK уменьшал гибель клеток по сравнению с
GFP, а подавление SNRK увеличивало гибель клеток, как измерено
этиловым эфиром тетраметилродамина (TMRE) и трипановым синим.Чтобы установить, влияет ли SNRK также на энергетический гомеостаз в клетках сердца
, мы сверхэкспрессировали SNRK и GFP аденовирусом в клетках H9c2.
SNRK увеличивал уровни АТФ и митохондриальный биогенез по сравнению с
с GFP. В совокупности наши результаты показывают, что SNRK активирует процессы сохранения энергии
, которые могут усилить защиту кардиомиоцитов
при стрессе.
А.К. Rines, None; М.А. Берк, нет; М. Ганефар, Нет; H.
Ардехали, Нет.
P175
Сверхэкспрессия митохондриально-нацеленного, Trascriptional-
Неактивный Stat3 в сердце защищает респираторный комплекс I
против ишемического повреждения
Кароль Щепанек, Ягеллонский университет биохимии и биохимии 9000, Польша, Биохимический факультет 9000, Польша и Вирджиния
Университет Содружества, Отдел биохимии и молекулярной биологии,
Ричмонд, Вирджиния, и Макгуайр VAMC, Ричмонд, Вирджиния; Qun Chen, Ying
Hu, Университет Содружества Вирджинии, Департамент внутренней медицины, Ричмонд,
VA, и McGuire VAMC, Ричмонд, Вирджиния; Marta Derecka, Jagiellonian
Univ, Факультет биохимии, биофизики и биотехнологии,
Краков, Польша, и Университет Содружества Вирджинии, Отдел
Биохимии и молекулярной биологии, Ричмонд, Вирджиния; Йозеф Дулак,
Ягеллонский университет, факультет биохимии, биофизики и
биотехнологии, Краков, Польша; Эдвард Дж. Леснефски, Вирджиния
Университет Содружества, Департамент внутренней медицины, Содружество Вирджинии
Университет
, Департамент биохимии и молекулярной биологии, Ричмонд, штат Вирджиния,
и McGuire VAMC, Ричмонд, Вирджиния; Эндрю К. Ларнер, Вирджиния
Университет Содружества, Отдел биохимии и молекулярной биологии,
Ричмонд, Вирджиния
Фактор транскрипции Stat3 является медиатором кардиозащиты, уменьшая повреждение при ишемии сердца (ISC) -реперфузии (REP).Stat3 тоже присутствует
Рич Харламов осыпал ее подарками
Сорвав сенсационный джекпот в казино Латвии Гарик Харламов балует шикарными подарками любимой жены Кристины Асмус. Актриса похвасталась потрясающим букетом роз от мужа в личном Instagram.
Влюбленные живут так, как будто у них сплошной медовый месяц. Романтик Гарик постоянно уделяет внимание Кристине, которая делится фото-подарками супруга от собственных подписчиков.За несколько дней до Дня святого Валентина Асмус проснулась и обнаружила рядом с кроватью огромный необыкновенный букет роз.
Актриса сфотографировала цветы и с благодарностью прокомментировала привлекательный жест Харламова. «Просыпайся такой бесценный. А он романтичный, но ты не знаешь))) Даже тридцать процентов не достало … Ну моя любимая. Уже запомнилась. Всем влюбленных дня!))» — от души пожелали поклонники Кристина.
Подписчики
, кроме того, поздравили артиста с наступающим 14 февраля и сообщили, что с недавним успехом казино Гарик теперь практически каждый день ни с того ни с сего может развлекать свою жену привлекательными букетами и прочими атрибутами сладкой жизни.
Как уже упоминал Days.Roux, не так давно латвийские СМИ со ссылкой на официальный сайт известного казино в Риге сообщили, что Гарик сорвал джекпот и разбогател на 317 тысяч евро. Была фотография счастливого Гарика с сертификатом, на котором грубо прописана сумма выигрыша. Но Кристину в разговоре с журналистами данные «подтверждения» не убедили, и она опровергла.
«Не могу объяснить, тем более, что неправильно. Вы дезинформированы. Это неправда! Все эти слухи!» — сказал Асмус.Любопытно, что сам Гарик произошедшая магия не опровергает. Когда художнику вручили документ о выигрыше со словами, о самом большом джекпоте в истории Латвии, фаворит эмоционально сказал: «Может, не поверите, но самый большой джекпот в моей жизни!»
В Ригу художник приехал не развлекаться, а работать. Казино он смотрел, чтобы скоротать время. Сумма в 317 тысяч евро — рекорд местного казино. 31 января артист попытал счастья на игровых автоматах. Как сообщает официальный сайт заведения, собственный выигрыш Гарик хочет потратить на выплату остатка по ипотечному кредиту.
разделов: Знаменитости
АТФ контролирует апоптоз нейронов, вызванный разрушением микротрубочек или депривацией калия | Молекулярная медицина
Материалы
SYTOX и H-33342 были получены от компании Molecular Probes (Юджин, Орегон). Субстрат каспазы, N -ацетил-Asp-Glu-Val-аспартиламинотрифторметилкумарин (DEVD-afc), 1-метил-4-фенилпиридиний (MPP + ), циклоспорин A (CsA) и S — нитрозоглутатион (GSNO) был получен от Biomol (Гамбург, Германия), а (+) — 5-метил-10, 11-дигидро-5H-дибензо [a, d] циклогептен-5, 10-имин (MK801) пришел от RBI (Biotrend Chemikalien GmbH, Кельн, Германия).Ингибиторы каспаз N -ацетил-Asp-Glu-Val-Asp-альдегид (DEVD-CHO), N -бензилоксикарбонил-Val-Ala-аспартил-фторметилкетон (zVAD-fmk), N -ацетли-Tyr Вал-Ала-аспартилхлорметилкетон (YVAD-cmk) и N, -бензилоксикарбонил-аспарти1-2,6-дихлорбензоилоксиметилкетон (ZD-cbk) были получены от Bachem Biochemica GmbH (Гейдельберг, Германия). DEVD-fmk был от Enzyme Systems (Дублин, Калифорния). Аннексин V (аннексин V), меченный флуоресцеином, был получен от Boehringer-Mannheim (Мангейм, Германия).FK506 поступил от Alexis (Грюнберг, Германия), а L- [4,5- 3 H] -лейцин был от Amersham-Buchler (Брауншвейг, Германия). Растворители и неорганические соли были от Merck (Дармштадт, Германия) или Riedel-de Haen (Зельце, Германия). Все остальные реагенты, не указанные далее, были от Sigma (Дайзенхофен, Германия).
Животные
Восьмидневных мышей BALB / c, не содержащих патогенов, были получены из отделения животных Университета Констанца. Все эксперименты проводились в соответствии с международными рекомендациями по минимизации боли и дискомфорта (рекомендации NIH и Директива Совета Европейского сообщества 86/609 / EEC).
Культура клеток
Мышиные CGC были выбраны для этих исследований и выделены, как описано ранее (21). Эти клетки образуют очень сложную аксодендритную сеть, состоящую более чем на 95% из одного типа нейронов. Диссоциированные нейроны высевали на чашки, покрытые поли-L-лизином (MW> 300 кДа), покрытые 100 µ г / мл (250 µ г / мл для стеклянных поверхностей) при плотности примерно 0,25 × 10 6 клеток / см 2 (800000 клеток / мл; 500 µ мкл / лунка, 24-луночный планшет) и культивировали в базовой среде Игла (BME, Gibco) с добавлением 10% инактивированной нагреванием фетальной телячьей сыворотки (FCS), 20 мМ KCl , 2 мМ L-глутамин и пенициллин-стрептомицин и цитозинарабинозид (добавлено через 48 часов после посева).Нейроны использовали без дальнейшей замены среды через 8 дней in vitro (DIV). В то время остаточная концентрация глюкозы в среде составляла около 1 мМ. Культуры подвергались воздействию колхицина или нокодазола в исходной среде для большинства экспериментов в присутствии 2 мМ M MK801 и 2 мМ Mg 2+ для предотвращения активации рецептора NMDA и эксайтотоксичности (22). Все ингибиторы добавляли за 30 мин до разрушения микротрубочек, если не указано иное.
Эксперименты по истощению АТФ и восполнению запасов глюкозы
В начальных экспериментах истощители АТФ [дезоксиглюкоза (DG), MPP + или GSNO] добавлялись за 30 минут до воздействия колхицина и оставались присутствующими на протяжении всего эксперимента.Для восстановления АТФ в культуральную среду добавляли глюкозу (0 или 10 мМ) за 3 часа до воздействия колхицина. В этой установке истощители АТФ добавляли через 8 часов после добавления колхицина. Измерения АТФ и синтеза белка (включение лейцина) проводили через 9,5 часов. Количество апоптоза и каспазной активности определяли через 18 часов. В некоторых экспериментах по отсроченному восполнению АТФ обработанные колхицином CGC удерживались без АТФ дезоксиглюкозой в течение 20 часов. После этого добавляли глюкозу (10 мМ) и наблюдали за ядерной конденсацией в течение следующих 4 часов.
Восполнение АТФ субстратами альтернативной энергии
Для тестирования субстратов альтернативной энергии, которые не увеличивают клеточную способность генерировать НАДФН через пентозофосфатный шунт, клетки инкубировали с дезоксиглюкозой плюс сукцинат, глутамином, глицерином или несколькими другими субстратами. Колхицин добавляли через 60 мин после энергетических субстратов. АТФ определяли через 10 часов, а апоптоз — через 16 часов.
Анализы жизнеспособности
Апоптоз и вторичный лизис обычно количественно определяли путем двойного окрашивания нейрональных культур 1 мкг / мл г / мл H-33342 (проницаемость мембраны, окрашивание синим флуоресцентным хроматином) и 0.5 µ M SYTOX (не проникающий через мембрану, зеленое флуоресцентное окрашивание хроматина), как описано ранее (23). Апоптотические клетки характеризовались подсчетом обычно конденсированных ядер. Было подсчитано около 600–1000 клеток в девяти различных полях в 2–3 различных лунках для культивирования, и эксперименты были повторены как минимум на трех разных препаратах. Кроме того, процент жизнеспособных клеток определяли по их способности восстанавливать 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2,5-дифенилтетранатрийбромид (МТТ) после инкубации с 0.5 мг / мл МТТ в течение 60 мин. В качестве дополнительного параметра для оценки целостности плазматической мембраны CGC загружали 0,5 мкМ M кальцеина-AM в течение 5 мин (23). Фрагментацию олигонуклеосомной ДНК количественно оценивали, как описано ранее, методом ELISA (24).
Иммуноцитохимия
CGC выращивали на культуральных чашках со стеклянным дном, фиксировали после эксперимента 4% параформадегидом и пермеабилизировали 0,1% Triton X-100 в фосфатно-солевом буфере (PBS). Чтобы контролировать изменения цитоскелета, мы окрашивали нейроны моноклональным антителом против тубулина β III (1: 300, # clone5G8, Promega, Мангейм, Германия), которое распознает только нейрональный тубулин, как описано ранее (20).В качестве вторичного антитела мы использовали связанное с Alexa ™ (λ ex = 488 нм, λ em = 512 нм) антитело против IgG мыши (1: 300, Molecular Probes). CGC помещали в PBS, содержащий 50% глицерина и 0,5 мк г / мл H-33342, и отображали с помощью конфокальной микроскопии (конфокальная сканирующая система TCS-4D UV / VIS; Leica AG, Benzheim и Leica Lasertechnik, Гейдельберг, Германия).
Синтез белка
Синтез белка анализировали, как описано ранее (25). Вкратце, 3 H-лейцин (2 мкл Ки) добавляли к CGC в объеме 10 мкл мкл в 24-луночных планшетах (конечная концентрация 150 МБк / мл).После 90 мин инкубации среду удаляли. Клетки трижды промывали ледяной трихлоруксусной кислотой (TCA, 10%) и сушили метанолом (-20 ° C). Слои клеток лизировали (0,3 М NaOH, 1% SDS) в течение 12 часов при 37 ° C, и включенную радиоактивность определяли с помощью β-сцинтилляционного счета.
Визуализация транслокации фосфатидилсерина
Экспрессия поверхностного фосфатидилсерина культур, выращенных на стеклянных чашках для культивирования, была проанализирована с помощью окрашивания аннексином V и конфокальной микроскопии (конфокальная сканирующая система TCS-4D UV / VIS; Leica AG и Leica Lasertechnik), как описано ранее ( 18).
Ферментативные анализы
Активность, подобную каспазе-3 (измеренную посредством расщепления DEVD-afc), анализировали в основном, как описано ранее (26,27). CGC лизировали в 25 мМ HEPES, 5 мМ MgCl 2 , 1 мМ EGTA, 0,5% Triton X-100, 1 µ г / мл лейпептина, 1 µ г / мл пепстатина, 1 µ г / мл апротинина и 1 мМ PEFA-блок, pH 7,5. Флуориметрический анализ проводили в микротитрационных планшетах с концентрацией субстрата 40 мкМ мкМ и общим количеством белка 5 мкМ мкг.Концентрации глюкозы в среде определяли методом гексокиназы / глюкозодегидрогеназы с использованием коммерческого набора (Sigma). АТФ измеряли люминометрически после лизиса клеток АТФ-высвобождающим агентом (Sigma), как описано ранее (14,22). Общий клеточный глутатион определяли согласно методу ферментативного цикла Титце (28). Вкратце, клетки, выращенные в 12-луночных планшетах, лизировали в разное время холодным 0,1 мМ HCl / 10 мМ ЭДТА и немедленно замораживали. После оттаивания глутатион определяли в супернатанте с помощью автоматического ферментативного анализатора (ACP5040, Eppendorff, Гамбург, Германия).Контрольные клетки имели содержание глутатиона 420 ± 20 пмоль / 10 6 нейронов.
Вестерн-блот анализ
CGC лизировали в буфере RIPA (150 мМ NaCl, 50 мМ Трис, 1% NP-40, 0,25% дезоксихолат натрия, 1 мМ EGTA) с добавлением ингибиторов протеаз [1 мМ фенилметилсульфонилфторид (PMSF), 1 мМ бензамидина, 1 мМ йодацетата, 1 мМ йодацетамида, 40 мкМ М лейпептина, 10 мкМ мкг / мл антипаина, 5 мкМ г / мл пепстатина]. Белок определяли методом бицинхониновой кислоты (Bio-Rad, München, Германия).
Белки разделяли с помощью SDS-PAGE с 5 µ г белка / дорожка на 8% полиакриламидных гелях для фодрина и 80 µ г белка на дорожку в гелях с градиентом 4–20% полиакриламида для каспазы-3 / -7. , а затем наносили на нитроцеллюлозные мембраны (Amersham-Buchler) в полусухом блоттере Bio-Rad при 2,5 мА / см 2 в течение 60 мин. Блоты блокировали TNT (50 мМ Tris pH 8,0, 150 мМ NaCl, 0,05% Tween 20), содержащим 5% сухого молока / 1% бычьего сывороточного альбумина (BSA), а затем инкубировали с любым моноклональным антителом против фодрина (1: 500, clone # 1622, Chemicon, Temecula, CA), или поликлональное антитело против каспазы-3 p17 (1: 1000, R # MF393, предоставлено Dr.D. W. Nicholson, Merck-Frost, Квебек, Канада) или поликлональное антитело против каспазы-7, p17 (1: 1000, # R151, великодушно предоставлено доктором Г. Коэном, Отдел токсикологии MRC, Лестер, Великобритания). Конкретно окрашенные полосы детектировали с помощью хемилюминесценции (ECL, Amersham) с использованием вторичных антител, связанных с поликлональным IgG пероксидазой хрена (1: 1000, Pharmingen).